特別提示:包括2×SYBR Green PCR Mastermix在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:2×SYBR Green PCR Mastermix
產(chǎn)品貨號:QN0949
產(chǎn)品規(guī)格:50T|200T
本產(chǎn)品為應(yīng)用SYBR Green Ⅰ染料進(jìn)行Realtime PCR擴(kuò)增反應(yīng)的預(yù)混系統(tǒng)。該預(yù)混系統(tǒng)提供了經(jīng)過優(yōu) 化的緩沖液、dNTP、HotStart Taq DNA 聚合酶、SYBR Green I染料和MgCl2,使用者只需加入適量的引物、 模板和水,即可進(jìn)行熒光定量PCR檢測。 該預(yù)混系統(tǒng)中的優(yōu)化緩沖液和 HotStart Taq DNA 聚合酶等可大大提高 PCR 產(chǎn)物的靈敏度和特異性。 Realtime PCR MasterMix 采用 HotStart Taq DNA 聚合酶,使 PCR 反應(yīng)具有更高靈敏度和特異性。 本產(chǎn)品可用于熒光 PCR 檢測,獲得靈敏、準(zhǔn)確且可靠的結(jié)果??蛇m合任意熒光定量 PCR 儀,如 ABI7000/7700/7900HT/7300/7500 Realtime PCR System、FTC2000、lightcycler 等。
產(chǎn)品特點(diǎn):
高特異性:本產(chǎn)品采用熱啟動 DNA 聚合酶,90℃以上2min后具有擴(kuò)增活性,可大大提高PCR產(chǎn)物的特異性。
高靈敏度:本產(chǎn)品包含的優(yōu)化的緩沖液可檢測低拷貝數(shù)的模板,且重復(fù)性好。
高適用性:本產(chǎn)品可適用于任意熒光定量 PCR 儀。
應(yīng)用實(shí)例:模版:提取RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,模版稀釋倍數(shù)102﹑103﹑104﹑105,設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增的目的片段長度是125bp。
儲存條件:-20℃
根據(jù)您的關(guān)注的
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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BTN131005
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cDNA第二鏈合成試劑盒
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30次
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YT372
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Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)
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200U|1000U
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YT388
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dTTP溶液(100mM)
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250μl
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YT395
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cDNA鏈合成試劑盒(RNase H-)
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10次
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YT400
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核酸酶清除劑(核酸酶噴霧清除劑)
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250ml
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WE0111
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BaldStar Taq DNA Polymerase
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500U|2500U
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關(guān)注
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名稱:dNTP和引物清除劑
貨號:BTN131141
規(guī)格:100次
本產(chǎn)品是基于酶學(xué)方法的一步法清除dNTP和引物的試劑,用于在PCR結(jié)束后去除殘留的dNTP和引物,使PCR產(chǎn)物可以不經(jīng)過任何形式的回收而直接用于后續(xù)的測序等反應(yīng)。
儲存條件:低溫運(yùn)輸和-20℃保存、有效期一年。
名稱:PCR級綠如藍(lán)DNA染料
貨號:BTN70909
規(guī)格:0.1mL
第二代的非飽和型熒光染料(如SYBR Green I)在高濃度下會抑制熒光PCR,所以反應(yīng)重復(fù)性很不穩(wěn)定,并且不能用于要求嚴(yán)格的Tm分析。本產(chǎn)品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一樣,是第三代飽和型熒光染料,在飽和濃度下也不抑制熒光PCR反應(yīng)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 飽和濃度不抑制PCR反應(yīng),因此得到的熒光信號更強(qiáng)。
2. 抗水解、抗熱解和抗光解的能力強(qiáng)于目前zuì常用的SYBR Green I。
3. 飽和濃度下染料分子沒有機(jī)會在DNA分子間發(fā)生移位,因此熒光強(qiáng)度跟DNA變性程度呈線性關(guān)系,可以用于精細(xì)的Tm 測定實(shí)驗(yàn),如High-resolution melting curve analysis等。
4.跟目前常用的PCR 儀器(包括iCycler、LightCycler、ABI 測序儀)兼容。激發(fā)和發(fā)射光譜跟FAM和SYBR Green I 接近,可以使用SYBR Green I的光學(xué)設(shè)置參數(shù)。
5. 不能滲透進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),毒性和致突變性遠(yuǎn)低于SYBR Green I。
6.可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲線分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛細(xì)管電泳等研究。
儲存條件:常溫運(yùn)輸、-20℃避光保存,有效期一年。
使用方法:
先將本產(chǎn)品放置在室溫融化,然后震蕩10秒鐘,短暫離心后待用。下面以50μL的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系為例說明其使用:
1.在一干凈的PCR 管中,加入下列成分:
試劑
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加入量
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10×PCR Buffer(No Mg2+)
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5μl
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MgCl2 50mM
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2.5μl
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dNTP 10mM
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1μl
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本產(chǎn)品(PCR級綠如藍(lán)染料)
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2.5μl
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Taq DNA聚合酶
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1-5U
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DNA模板
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適量
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PCR引物
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5-50 pmol each
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補(bǔ)水到
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50μl
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2. 放入熒光PCR 儀中進(jìn)行qPCR,并在退火或延長反應(yīng)時(shí)記錄熒光信號。使用的光學(xué)參數(shù)可以跟FAM或SYBR Green I 完全一樣。
注意事項(xiàng):
1. 如果使用iCycler,可以不加FAM;如果使用ABI系統(tǒng),需要在Well Inspector選項(xiàng)下的非特異參照中選擇“無”;使用LightCycler時(shí),zuì好在PCR 體系中再加入終濃度為0.5mg/mL的BSA以降低儀器對染料和模板的非特異吸附。
2. 如果使用化學(xué)修飾過的Taq DNA聚合酶,可能需要減低KCl的濃度并提高Tris的濃度。
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