pUC18載體是高品質的克隆與表達產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多pUC18載體等克隆與表達產品請聯(lián)系我司咨詢訂購。

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特別提示：包括pUC18載體在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：pUC18載體
英文名稱：pUC18 vector
產品貨號：RFT117
產品規(guī)格：2μg

pUC18載體適用于雙脫氧法對DNA 片段進行測序，它克隆的DNA 片段比使用 M13 phage作載體時克隆的片段長。 由于在 lacZ 領域中含有多克隆位點， 因此可以在含有 IPTG、 X-Gal的平板培養(yǎng)基上通過藍白篩選判斷載體中有無 DNA 片段的插入。同時還可以通過載體上的lac promoter表達外源基因， 使用M13系列的通用引物對插入載體中的DNA片段進行測序。



貯存液：10 mM Tris-HCl(pH8.0) ，1 mM EDTA。
鏈長：2686 bp。
制備：使用 CsCl-EtBr 密度梯度超離心法純化。
純度：
1、含 70%以上的雙鏈 Covalently closed circular DNA(RFI) 。
2、用雙脫氧測序法確認多克隆位點。
3、確認 EcoR I，Sac I，Kpn I，Sma I，BamH I，Xba I，Sal I，Pst I，Sph I 和 Hind III只有一個酶切位點。
用途：
1、外源基因的克隆以及使用 lac 啟動子進行表達。
2、使用 M13 系列引物進行 DNA測序。

儲存條件：-20℃。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN100103B	pression/BTN100103B.html" target="_blank">裂殖酵母化學感受態(tài)細胞制備試劑盒	20次
BTN90208	pression/BTN90208.html" target="_blank">大腸桿菌SURE化學感受態(tài)細胞	0.1mL*10
BTN140388	pression/BTN140388.html" target="_blank">釀酒酵母NMY51感受態(tài)細胞	10×100μL
BTN70602	pression/BTN70602.html" target="_blank">DNA快速連接試劑盒	100次
YT023	pression/YT023.html" target="_blank">感受態(tài)細胞制備試劑盒	100次
YT465	pression/YT465.html" target="_blank">C端DsRed標簽融合蛋白質粒(紅色熒光蛋白)	1μg
YT471	pression/YT471.html" target="_blank">C端His標簽融合蛋白質粒	1μg

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名稱：cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)
貨號：BTN90407C
規(guī)格：5μg
本產品Lambda DNA(λDNA)為λ噬菌體中的DNA，是一種常見的DNA底物，分子量為31.5×106Da/48502bp，濃度為200～500μg/ml。A型為普通Lambda DNA。B型為不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型為非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是從感染的大腸桿菌GM119菌株中分離得到的。該菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作為對DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

儲存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存、有效期一年。

純度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 瓊脂糖凝膠電泳出現清晰單一條帶。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保溫16小時后，瓊脂糖凝膠電泳時出現清晰單一條帶。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小時)后，在瓊脂糖凝膠電泳時出現8條清晰的DNA電泳帶。

名稱：大腸桿菌Rosetta-gami (DE3)pLys化學感受態(tài)細胞
貨號：BTN130560
規(guī)格：0.1mL*10
 Rosetta-gami(DE3)pLysS是Rosetta-gami(DE3)的的衍生菌株，用于具有毒性的含二硫鍵真核蛋白的表達。它是高度嚴緊表達宿主菌，包括Tunerlac 透性酶突變以及gor B/gor突變幫助細胞質內二硫鍵形成。

基因型：Δ(ara–leu)7697 Δ lac X74 Δ phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F"[lac+lacIq pro](DE3)gor522::Tn10(TcR)gorB::kan plysS pRARE(CmR)

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養(yǎng)基等。

使用方法：
1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μL，可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態(tài)細胞為例。
2. 待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。

注意事項：
1. 涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA 總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA 總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

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