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為什么我們要用瓊脂糖凝膠做電泳載體？
發(fā)布時(shí)間：2022-01-21瀏覽次數(shù)：1167返回列表
常用的電泳實(shí)驗(yàn)載體：
1、醋酸纖維素薄膜電泳 ：醋酸纖維素薄膜電泳是以醋酸纖維素薄膜為支持物，它是纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經(jīng)乙酰化而制成。
2、 瓊脂糖凝膠電泳 ：瓊脂糖凝膠電泳是一種以瓊脂糖凝膠為支持物的凝膠電泳。
3、聚丙烯酰胺凝膠電泳 ：聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑又稱為共聚體的N,N’-甲叉雙丙烯酰胺（簡(jiǎn)稱Bis）在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡(jiǎn)稱PAGE)。
4、等電聚焦電泳 ：等電聚焦電泳是利用具有pH梯度的電泳介質(zhì)來(lái)分離等電點(diǎn)(pI)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。
瓊脂糖凝膠電泳其分析原理與其它支持物電泳的主要區(qū)別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，直接參與帶電顆粒的分離過(guò)程，在電泳中，物質(zhì)分子通過(guò)空隙時(shí)會(huì)受到阻力，大分子物質(zhì)在泳動(dòng)時(shí)受到的阻力比小分子大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅依賴于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大地提高了分辨能力。
瓊脂糖系天然的瓊脂加工制得，天然瓊脂是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（約占80%）及瓊脂膠組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構(gòu)成的中性物質(zhì)，不帶電荷。而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強(qiáng)酸性多糖，由于這些基團(tuán)帶有電荷，在電場(chǎng)作用下能產(chǎn)生較強(qiáng)的電滲現(xiàn)象。所以常用于血清蛋白、血紅蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶等同工酶的分離和鑒定，為臨床某些疾病的鑒別診斷提供了可靠的依據(jù)。與免疫化學(xué)反應(yīng)相結(jié)合發(fā)展成為免疫電泳技術(shù)，用于分離和檢測(cè)抗原。可對(duì)目前常用的瓊脂糖進(jìn)行某些修飾，如引入化學(xué)基團(tuán)羥乙基，則可使瓊脂糖在65℃左右便能熔化，被稱為低熔點(diǎn)瓊脂糖。該溫度低于DNA的熔點(diǎn)，而且凝膠強(qiáng)度又無(wú)明顯改變。以此為支持物進(jìn)行電泳，稱為低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠電泳，主要應(yīng)用于DNA研究。如DNA鑒定，DNA限制性內(nèi)切酶圖譜制作等，為DNA分子及其片段分子量測(cè)定和DNA分子構(gòu)象的分析提供了重要手段。
總結(jié)瓊脂糖凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)如下：
1. 瓊脂糖凝膠電泳操作簡(jiǎn)單，電泳速度快，樣品不需事先處理就可以進(jìn)行電泳。
2. 瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻，含水量大(約占98%~99%)，近似自由電泳，樣品擴(kuò)散較自由電流，對(duì)樣品吸附極微，因此電泳圖譜清晰，分辨率高，重復(fù)性好。
3. 瓊脂糖透明無(wú)紫外吸收，電泳過(guò)程和結(jié)果可直接用紫外光燈檢測(cè)及定量測(cè)定。
4. 電泳后區(qū)帶易染色，樣品極易洗脫，便于定量測(cè)定。制成干膜可長(zhǎng)期保存
