雙縮脲蛋白定量試劑盒的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品，本制品用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要雙縮脲蛋白定量試劑盒等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術服務，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關系，擁有較好的企業(yè)信譽和品牌形象。 主營產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

特別提示：包括雙縮脲蛋白定量試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：雙縮脲蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品貨號：GL1490
產(chǎn)品規(guī)格：500T|1000T

用途：
測定總蛋白質(zhì)含量

注意事項：
主要由雙縮脲總蛋白試劑、蛋白質(zhì)標準品組成，對于血清總蛋白檢測，膽紅素、血紅蛋白、葡聚糖等有一定的干擾作用。

儲存條件：室溫，12個月

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名稱：一站式GST標記蛋白質(zhì)微量純化套裝(含溶菌酶和核酸酶)
貨號：BTN111116B
規(guī)格：20次
重組蛋白N端的GST谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶能提高重組蛋白的水溶性，所以常用于蛋白質(zhì)重組表達。GST-谷胱甘肽親和層析是利用GST 標記的蛋白能與谷胱甘肽層析介質(zhì)結(jié)合，并能被還原型谷胱甘肽洗脫的特點而建立，是目前分離純化GST 標記蛋白質(zhì)的重要方法。本產(chǎn)品就是專門用于上述目的，其原理如下：


產(chǎn)品特點：
1．一站式套裝，含所需的谷胱甘肽介質(zhì)、溶液和層析柱，用戶只需要提供表達GST 標記蛋白的細菌(酵母、桿狀病毒、培養(yǎng)細胞)即可，非常方便。
2．專一性強，一次過柱即可獲得純度高達95%的GST-標記蛋白。
3．只能在非變性條件下使用，只可用于純化沒形成包涵體的GST 標記蛋白。
4．每次可以處理20mL的表達菌液，適合初步篩選和鑒定。
5．提供4mL濃度為50%的谷胱甘肽-Agarose 介質(zhì)，可吸附5-10mg GST 標記蛋白質(zhì)。
6．本介質(zhì)可以反復使用多次。

試劑盒組成：

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介質(zhì),50%	4ml	4ml
10×PBS緩沖液	100ml	100ml
溶液A	1ml	無
GST洗脫緩沖液成分一	25ml	25ml
GST洗脫緩沖液成分二	約80mg	約80mg
溶菌酶(20KU/mg)	無	30mg
Benzonase(2U/μL)	無	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL層析柱(帶篩板)	1套	1套
說明書	1份	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低溫運輸。收到貨后，介質(zhì)需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的樣品zuì好都留存少量作為SDS-PAGE分析的對照，在下面描述中就不再提醒。
2．本實驗需要用到的1×PBS緩沖液可用自備的超純水稀釋本試劑盒提供的10×PBS緩沖液而得。PBS緩沖液用超純水稀釋后其容易長細菌，注意防止污染。
3．GST 洗脫液的配制方法是將約80mg GST 洗脫液成分二干粉全部加入到GST 洗脫液成分一溶液中，搖晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脫液，分裝成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重組蛋白的表達和細菌收集
1．37℃振蕩培養(yǎng)20mL含表達質(zhì)粒的細菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到終濃度為0.1mM，30℃振蕩培養(yǎng)3小時或22℃振蕩培養(yǎng)8小時(或過夜)。
3．4℃ 5000g離心10分鐘收集20mL表達菌液，棄上清。
4．用1×PBS緩沖液重懸細菌沉淀，4℃ 5000g離心10分鐘，棄上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、細胞裂解
5．如果用本產(chǎn)品A型，用1mL冰浴的新鮮配制的細胞裂解液(1mL 1×PBS緩沖液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重懸細菌沉淀，冰上超聲裂解菌體直到在顯微鏡下看見大多數(shù)細胞破裂。超聲參數(shù)需根據(jù)儀器型號自行摸索，一般選1K-10K 頻率處理15次，每次20秒，間隔1分鐘(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否則會堵塞層析柱。
6．如果用本產(chǎn)品B型，在1mL冰浴的新鮮配制的細胞裂解液(在20mL 1×PBS緩沖液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分裝成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重懸細菌沉淀后冰上放置30分鐘，得到細菌裂解物。
7．將超聲或酶法細胞裂解物在13000 g 4℃離心10分鐘去除未裂解細胞和裂解細胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 標記蛋白。

三、層析柱的制備和GST蛋白純化
8．搖晃將谷胱甘肽-Agarose 介質(zhì)充分混勻后，取適量加入到預放了一片篩板的層析柱中(介質(zhì)用量需要根據(jù)GST蛋白產(chǎn)量決定，100mL菌液一般使用200μL介質(zhì)即可)。下列步驟各溶液的用量均針對200μL介質(zhì)而定，如果介質(zhì)用量不同，各溶液用量需相應調(diào)整。
9．用5mL預冷的1×PBS緩沖液洗柱。
10．將第7 步得到的上清液(含可溶性GST標記蛋白)上柱，讓重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE電泳。GST和谷胱甘肽之間的結(jié)合很緩慢，所以流速一定不能快，否則結(jié)合不充分。流速一般在0.2-1mL/分鐘即可。如要提高GST 標記蛋白與介質(zhì)的結(jié)合效率，可用本試劑盒提供的紅蓋將層析柱下的漏液口堵上，讓細菌裂解液和介質(zhì)在4℃結(jié)合30分鐘或過夜。也可以將穿透液反復上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS緩沖液洗柱，收集并保存穿透液(含雜蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脫液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 標記蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后續(xù)處理(如濃度測定或SDS-PAGE電泳)或-80℃長期放置。
13．對收集的2種穿透液和洗脫液進行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不預先脫鹽，則只能用Bradford法或OD 檢測法(1 OD280 約等于0.5mg/mL蛋白)測定穿透液和洗脫液的蛋白濃度。由于GST的分子量為26 KD，所以在SDS-PAGE膠上，GST 標記蛋白將比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢復(本試劑盒不含所需試劑)
1．用3倍體積的6M鹽酸胍處理柱子10分鐘。
2．用3倍體積的超純水處理柱子10分鐘。
3．用3倍體積的緩沖液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)處理柱子10分鐘。
4．用3倍體積的緩沖液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)處理柱子10分鐘。
5．再重復3-4 步兩次。
6．用3倍體積的超純水處理柱子3次。
7．用3倍體積的1×PBS緩沖液處理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍體積的1×PBS緩沖液待用。若長時間不用，則第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN100929	細菌膜蛋白質(zhì)微量提取試劑盒	50次
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SNM407	抗體孵育膜	100張/包
SNM446	麗春紅染色液	100ml
KFS026	成神經(jīng)細胞鑒定NF/NSE免疫組化試劑盒(IHC)	50T

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