產(chǎn)品描述

Bradford蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一。它是根據(jù)Bradford染液（考馬斯亮藍G-250染料）與蛋白結(jié)合，使染料的大吸收峰從A456變?yōu)锳595，且測定的吸光值與蛋白濃度成正比關(guān)系的原理設(shè)計的。本法通過吸光值，推算蛋白濃度，實現(xiàn)了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高，比Lowry法大約高四倍，低蛋白檢測量可達1μg。測定速度快、簡單，僅需一種試劑即可，且不受大多數(shù)樣品中化學試劑的影響。

古朵生物提供二種規(guī)格的Bradford蛋白濃度檢測試劑盒，比色皿法分別可做125次和625次。酶標法分別可做500次和2500次。

產(chǎn)品組分

運輸與保存方法

冰袋運輸。

染色液4℃保存，蛋白標準品常溫或4℃保存，有效期一年。

注意事項

1）Bradford染色液使用前，應(yīng)充分混勻。同時，酶標儀需預熱20min。

2）Bradford染色液需恢復到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏度。另，使用前需顛倒幾次以充分混勻。

3）由于Bradford染液的顏色反應(yīng)并不是同遞增的蛋白濃度呈線性關(guān)系，因此每次試驗都必須建立標準曲線。另外，為了得到的結(jié)果，每個蛋白梯度和樣品均需做復孔。

4）Bradford法測定蛋白濃度對大多數(shù)化學物質(zhì)的兼容性比較好，比如對還原劑DTT的兼容性高達5mM。但會受到略高濃度的去垢劑影響，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。對于含去垢劑的樣品，建議使用BCA增強型蛋白定量檢測試劑盒【貨號：20201ES76】。

5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
6）本產(chǎn)品僅作科研用途！

操作方法

一、配制標準品

1. 配制BSA標準品體系

注：標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進行稀釋。

BSA標準品體系配制可參考表一。

二、檢測方法

A. 標準比色皿檢測（線性范圍：100-1500μg/mL）

1. 各取20μL不同濃度標準品和待測樣品加入到反應(yīng)管中；

2. 加入1mL Bradford染色液，混勻。室溫孵育10min?！咀ⅰ浚簶颖臼覝胤跤龝r間不可超過1h；

3. 分光光度計上測定595nm處的吸光度，用裝滿水的比色皿對儀器校零。之后測定所有樣本濃度。

4. 根據(jù)BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數(shù)），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-終的OD595nm）。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。

B. 標準微孔板檢測（線性范圍：100-1500μg/ml）

1. 各取5μL各濃度標準品和待測樣品加入到微孔板中；

2. 每孔加入250μL Bradford染色液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時間不可超過1h；

3. 酶標儀上測定595nm處的吸光度?；蛘咂渌?75-615nm波長范圍內(nèi)的吸光度，但是相對于595nm，吸光度會存在0-10%的損失。

4. 根據(jù)BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數(shù)），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-終的OD595nm）。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。

注：a）由于酶標板的光徑比比色皿短，經(jīng)酶標板檢測得到的OD595nm會低于比色皿檢測所得，因此可能降低本法的檢測下限。要得到高的OD595nm，可使用7-10μL標準品/待檢樣本，和250μL Bradford染色液來進行檢測。b）如果使用與酶標儀相關(guān)的曲線擬合算法（curve fitting algorithm），那么四參數(shù)或者佳擬合曲線可能得到為的結(jié)果，并不是單純的線性擬合。若是手動標記各點濃度，點-點曲線出來的結(jié)果于線性擬合。若對結(jié)果準確性的要求不是非常嚴格，可使用線性擬合分析數(shù)據(jù)。