特別提示:包括NAD+/NADH熒光檢測(cè)試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:NAD+/NADH熒光檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):KFS374
產(chǎn)品規(guī)格:50T|100T
本檢測(cè)法適用于96 孔板或384 孔板,顯現(xiàn)出高靈敏度和干擾小,在540nm 出激發(fā),發(fā)射光在590nm處。本試劑盒可以測(cè)定100 個(gè)樣品。
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)是在細(xì)胞中找到的兩個(gè)重要的輔因子。NADH 由NAD+加H 還原得到,NAD+由NADH 氧化而來(lái)。在腺嘌呤核苷酸的2’位通過(guò)酯鍵連接加上一個(gè)磷酸基團(tuán),構(gòu)成NADP。NADH 作為氫的載體,在呼吸鏈中通過(guò)化學(xué)滲透偶聯(lián)的方式,合成ATP。NADH 分子是線粒體中能量產(chǎn)生鏈中的控制標(biāo)志物。NADH 水平的上升指示代謝失衡的出現(xiàn)。監(jiān)視NADH的氧化還原狀態(tài)是表征活體內(nèi)線粒體功能的zuì佳參數(shù)。傳統(tǒng)的NAD/NADH 和NADP/NADPH 的檢測(cè)是通過(guò)測(cè)定NADH 或者NADPH 在340nm 處的吸光值。這種方法靈敏度低,且受嚴(yán)重干擾;因?yàn)闄z測(cè)在紫外光范圍內(nèi),需要昂貴的石英微孔板。本試劑盒提供簡(jiǎn)單便捷的方法檢測(cè)樣品內(nèi)NAD+,NADH 的含量以及比例。試劑盒提供的循環(huán)反應(yīng)酶能夠特異性的識(shí)別底物NAD+/NADH ,并且不需要對(duì)混合樣品中的NAD+/NADH 進(jìn)行純化。
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名稱:ATP檢測(cè)試劑盒
貨號(hào):YT361
規(guī)格:200次
本試劑盒可以用于檢測(cè)普通溶液、細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP水平。細(xì)胞和組織樣品一步裂解即可完成樣品制備,檢測(cè)靈敏度高達(dá)1nmol/L,化學(xué)發(fā)光可以持續(xù)穩(wěn)定達(dá)30分鐘,并且獲得的樣品還可以同時(shí)進(jìn)行Western檢測(cè)。本試劑盒的使用方便快捷,通常10-20個(gè)樣品可以在30-60分鐘內(nèi)測(cè)定完畢。一個(gè)包裝的本試劑盒至少可以檢測(cè)200個(gè)樣品。
試劑盒組分:
ATP檢測(cè)試劑—————————2ml(0.5ml/管,共4管)
ATP檢測(cè)試劑稀釋液——————20ml
ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.5mM)——————0.1ml
ATP檢測(cè)裂解液————————100ml
ATP作為zuì重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過(guò)程中起著重要作用。ATP水平的改變,會(huì)影響細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下,ATP水平會(huì)下降,而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細(xì)胞凋亡時(shí)ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時(shí)發(fā)生。
樣品制備非常簡(jiǎn)單。本試劑盒提供了可以用于細(xì)胞和組織裂解的ATP檢測(cè)裂解液,簡(jiǎn)單裂解后即可用于ATP檢測(cè)。無(wú)需進(jìn)行高氯酸或三lǜ乙酸(TCA)抽提,或樣品裂解后的煮沸等繁瑣操作。
本試劑盒根據(jù)螢火蟲(chóng)熒光素酶(firefly luciferase)催化熒光素產(chǎn)生熒光時(shí)需要ATP提供能量研制而成。 當(dāng)螢火蟲(chóng)熒光素酶和熒光素都過(guò)量時(shí),在一定的濃度范圍內(nèi)熒光的產(chǎn)生和ATP的濃度成正比。這樣就可以高靈敏地檢測(cè)溶液中的ATP濃度。本試劑盒在樣品體積為100微升時(shí)可以檢測(cè)濃度低達(dá)1nmol/L的ATP。而常規(guī)的細(xì)胞或組織裂解液中ATP的濃度僅為0.1-1μmol/L,一些常見(jiàn)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)ATP水平約為10nmol/mg蛋白。并且本試劑盒的檢測(cè)濃度范圍非常大,檢測(cè)上限可以高達(dá)10μmol/L,并在5nmol/L-10μmol/L范圍內(nèi)可以形成良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
本試劑盒進(jìn)行了特殊的優(yōu)化設(shè)計(jì),使檢測(cè)ATP時(shí)的化學(xué)發(fā)光非常穩(wěn)定。對(duì)于ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測(cè)結(jié)果顯示,在開(kāi)始反應(yīng)后10分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光無(wú)明顯下降,開(kāi)始反應(yīng)后30分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光的下降不超過(guò)10%。
使用本試劑盒中的ATP檢測(cè)裂解液裂解獲得的細(xì)胞或組織樣品,不僅可以用于ATP檢測(cè),還可用于檢測(cè)蛋白濃度、進(jìn)行SDS-PAGE或一些常規(guī)的較易溶解蛋白的Western檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1. ATP檢測(cè)試劑中含有熒光素酶,反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致其逐漸失活。盡管經(jīng)測(cè)試ATP檢測(cè)試劑反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)明顯影響,為取得較好的使用效果,建議用戶使用時(shí)的凍融次數(shù)不宜超過(guò)3次。ATP檢測(cè)試劑稀釋成ATP檢測(cè)工作液后,zuì好一次用完,不宜凍存后再使用。
2. ATP特別是裂解后樣品中的ATP在室溫不太穩(wěn)定,需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)6小時(shí)。
3. 本試劑盒需使用luminometer,即化學(xué)發(fā)光儀(檢測(cè)熒光素酶報(bào)告基因時(shí)所用的儀器)。如果沒(méi)有l(wèi)uminometer,也可以使用液閃儀。液閃儀的測(cè)定效果取決于液閃儀的檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)精度。
4. 使用可檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的多功能酶標(biāo)儀時(shí),所用96孔板宜為孔和孔之間不透光的黑板或白板。如使用常規(guī)的透明96孔板,需特別注意正確設(shè)置酶標(biāo)儀測(cè)定時(shí)板子的類型,同時(shí)也可以在檢測(cè)孔之間設(shè)置間隔孔,以盡量避免鄰近孔之間的相互干擾。
5. 本試劑盒提供的ATP檢測(cè)裂解液可以有效裂解并釋放常見(jiàn)的培養(yǎng)細(xì)胞和組織中的ATP。對(duì)于一些特殊的組織或樣品,如果發(fā)現(xiàn)檢測(cè)出來(lái)的ATP水平顯著低于預(yù)期水平,可以在裂解樣品后并且在離心前,取部分樣品煮沸2分鐘以充分釋放ATP。煮沸后樣品中的蛋白會(huì)變性,從而會(huì)在后續(xù)的離心步驟中被沉淀,因此煮沸的樣品不能用于蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE和Western檢測(cè)??梢允褂檬S嗟牟糠謽悠愤M(jìn)行蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE和Western檢測(cè)。
儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期6個(gè)月。

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