Real-Time PCR預(yù)混反的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品，本制品用于科研目的，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多Real-Time PCR預(yù)混反等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢訂購(gòu)。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營(yíng)血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國(guó)內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長(zhǎng)期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。

特別提示：包括Real-Time PCR預(yù)混反應(yīng)液（探針?lè)?在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Real-Time PCR預(yù)混反應(yīng)液（探針?lè)?
英文名稱：SuperReal PreMix（Probe)
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0104
產(chǎn)品規(guī)格：125次|500次|5000次

本制品是采用探針?lè)ㄟM(jìn)行Real-Time PCR的專用試劑，為2×濃度的PreMix形式，反應(yīng)液配制十分簡(jiǎn)單方便。采用了獨(dú)特的雙組分熱啟動(dòng)DNA聚合酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)在PCR反應(yīng)液中加入熒光探針，然后檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程中的熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。采用SYBR Green I嵌合熒光法進(jìn)行Real Time PCR時(shí)，建議使用SuperReal PreMix Plus （SYBR Green)（WH0103）

本制品中雙熱啟動(dòng)酶構(gòu)成了獨(dú)特的酶活自動(dòng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)。酶活自動(dòng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)是由化學(xué)修飾的HotStar Taq DNA聚合酶和抗體修飾的Anti Taq DNA聚合酶組成。其中HotStar Taq DNA聚合酶占大部分比例，其聚合酶活性的激活是嚴(yán)格依賴于95℃高溫的一個(gè)緩釋過(guò)程，而Anti Taq DNA聚合酶則在95℃高溫下完全激活。經(jīng)過(guò)95℃條件下孵育15min激活大部分HotStar Taq DNA聚合酶，進(jìn)入PCR循環(huán)后，每經(jīng)過(guò)一輪95℃條件下變性，即可重新激活一部分HotStar Taq DNA聚合酶。HotStar Taq DNA聚合酶獨(dú)特的酶活緩釋機(jī)制使其可以與Anti Taq DNA聚合酶構(gòu)成獨(dú)特的酶活自動(dòng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)。PCR反應(yīng)初期，完全激活的AntiTaq DNA聚合酶可以協(xié)同已經(jīng)激活的HotStar Taq DNA聚合酶達(dá)到zuì佳酶活狀態(tài)，而在整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)程中，每一輪新釋放的HotStart Taq DNA聚合酶活力剛好可以彌補(bǔ)因熱變性所導(dǎo)致的部分酶活損失。因此，SuperReal PreMix在整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)程始終保持zuì佳的DNA聚合酶活力，配合精心優(yōu)化Buffer體系，從而具有定量準(zhǔn)確，擴(kuò)增效率高，重復(fù)性好和寬廣的可信范圍的特點(diǎn)。

本制品經(jīng)過(guò)優(yōu)化特別有利于Taq酶發(fā)揮其5′-3′外切酶活性，使熒光信號(hào)的釋放達(dá)到zuì佳的效果。此外，SuperRealPreMix（Probe)也充分降解了探針熒光淬滅基團(tuán)的信號(hào)釋放，經(jīng)過(guò)上述優(yōu)化，用相同量的模板將得到更強(qiáng)的信號(hào)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
· SuperReal PreMix （Probe)采用了獨(dú)特的雙組分熱啟動(dòng)DNA聚合酶（化學(xué)修飾的HotStar TaqDNA聚合酶和抗體修飾的Anti Taq DNA聚合酶），從而構(gòu)成酶活自動(dòng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)，配合精心優(yōu)化的buffer體系，具有定量準(zhǔn)確，擴(kuò)增效率高，重復(fù)性好和寬廣的可信范圍的特點(diǎn)。
·本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)優(yōu)化使熒光信號(hào)的釋放達(dá)到zuì佳的效果，同時(shí)充分降解了探針熒光淬滅基團(tuán)的信號(hào)釋放，用相同量的模板將得到更強(qiáng)的信號(hào)。
· SuperReal PreMix （Probe)為2×濃度的PreMix形式，PCR反應(yīng)液配制時(shí)，只需加入模板、引物、滅菌蒸餾水便可進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，操作簡(jiǎn)單方便。
·本產(chǎn)品附帶ROX Reference Dye，用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差，方便客戶針對(duì)不同型號(hào)熒光定量PCR儀時(shí)選擇對(duì)應(yīng)濃度使用。

應(yīng)用范圍：
廣泛地適用于在ABI（PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One/7500/7500 Fast）、Stratagen（Mx3000P/Mx3005P/Mx4000）、Roche、Bio-Rad和Eppendorf等各種熒光定量PCR儀上采用SYBR Green法進(jìn)行基因表達(dá)分析和核酸檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組成：

組分	20μl×125次	20μl×500次	20μl×5000次
2×SuperRealPreMix（Probe)	1.25ml	4×1.25ml	40×1.25ml
50×ROX Reference Dye	250μl	1ml	10×1ml
RNase-Free ddH2O	2×1ml	5×1ml	50×1ml

儲(chǔ)存條件：收到本產(chǎn)品后，請(qǐng)立即置于-20℃保存。從-20℃取出使用時(shí)，將凍存的2×SuperReal PreMix（Probe)和50×ROX Reference Dye融解，然后輕輕顛倒混勻，待溶液完全均一后再行使用。如解凍后沒(méi)有使用，須徹底混勻后重新冷凍。（在解凍過(guò)程中鹽會(huì)出現(xiàn)分層現(xiàn)象，未混勻進(jìn)行冷凍，鹽晶體的析出將會(huì)對(duì)酶造成損害)。如需一段時(shí)間內(nèi)經(jīng)常取用，可在2-8℃條件下儲(chǔ)存3個(gè)月。避免反復(fù)多次凍融。

注意事項(xiàng)：請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。
1．PCR反應(yīng)的預(yù)變性條件必須設(shè)定為95℃ 15min，用以激活熱啟動(dòng)酶。
2．如果試劑沒(méi)有混勻，其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。使用時(shí)請(qǐng)上下顛倒輕輕混勻，請(qǐng)不要使用振蕩器進(jìn)行混勻，盡量避免出現(xiàn)泡沫，并經(jīng)瞬時(shí)離心后使用。
3．引物終濃度為300 nM，探針終濃度為200 nM可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。
4．需要進(jìn)一步優(yōu)化引物濃度的，可以在50-900 nM范圍內(nèi)調(diào)整；需要進(jìn)一步優(yōu)化探針濃度的，可以在100-500 nM范圍內(nèi)調(diào)整。
5．20μl反應(yīng)體系中，基因組DNA或cDNA模板的使用量一般小于100ng，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為模板時(shí)，使用量應(yīng)不超過(guò)PCR體系終體積的20%。

操作步驟：

一、建立Real-Time PCR反應(yīng)體系：
1．融解2×SuperReal PreMix （Probe)（如果保存在-20℃)，50×ROX Reference Dye，模板，引物和RNase-Free ddH2O，并將所有試劑在室溫下平衡并徹底混勻。
2．建議置于冰上進(jìn)行Real-Time PCR反應(yīng)液的配制

成分	50μl體系	25μl體系	20μl體系	終濃度
2×SuperReal PreMix（Probe)	25μl	12.5μl	10μl	1×
正向引物（10μM)	1.5μl	0.75μl	0.6μl	0.3μM①
反向引物（10μM)	1.5μl	0.75μl	0.6μl	0.3μM①
熒光探針（10μM)	1.0μl	0.5μl	0.4μl	0.2μM②
cDNA模板	-	-	-	≤200 ng
50×ROX Reference Dye③	-	-	-	-
RNase-free ddH2O	至50μl	至25μl	至20μl	-

①引物終濃度為300 nM可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。擴(kuò)增效率不高時(shí)，可增加PCR反應(yīng)體系中的引物濃度；發(fā)生非特異擴(kuò)增時(shí)，可適當(dāng)減少PCR反應(yīng)體系中的引物濃度。需要進(jìn)一步優(yōu)化引物濃度的，可以在50-900 nM范圍內(nèi)調(diào)整。
②探針的濃度與使用的Real-Time PCR擴(kuò)增儀、探針?lè)N類、熒光標(biāo)記物質(zhì)種類有關(guān)，實(shí)際使用時(shí)請(qǐng)參照儀器說(shuō)明書，或各熒光探針的具體使用說(shuō)明進(jìn)行。通常探針終濃度為200 nM可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。需要進(jìn)一步優(yōu)化探針濃度的，可以在100-500 nM范圍內(nèi)調(diào)整。
③幾種常見儀器的zuì適ROX Reference Dye濃度見下表：
 ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One等：2.5×（例如：2.5μl ROX/50μl體系)
。
 ABI 7500、7500 Fast；Stratagene Mx3000P、Mx3005P和Mx4000等：0.5×（例如：0.5μl ROX/50μl體系。
 Roche儀器，Bio-Rad儀器，Eppendorf儀器等：無(wú)需添加。
二、進(jìn)行Real time PCR反應(yīng)：
建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)。變性時(shí)間可在1-3 sec范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整，退火/延伸時(shí)間可在20-32 sec范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。
兩步法反應(yīng)程序：

階段	循環(huán)	溫度	時(shí)間	內(nèi)容	熒光信號(hào)采集
預(yù)變性	1×	95℃	15min	預(yù)變性	否
PCR反應(yīng)	40×	95℃	3sec①	變性	否
		60℃	20-32sec②	退火/延伸	是

①使用不同型號(hào)儀器進(jìn)行時(shí)間設(shè)定時(shí)，請(qǐng)按照儀器使用說(shuō)明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，使用ABI 7900HT/7900HT Fast/ViiA 7/StepOne/StepOnePlus時(shí)可設(shè)定為1 sec。
②使用不同型號(hào)儀器進(jìn)行時(shí)間設(shè)定時(shí)，請(qǐng)按照儀器使用說(shuō)明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，幾種常見儀器的時(shí)間設(shè)定如下：
 使用ABI 7500 Fast/7900HT/7900HT Fast/ViiA 7/StepOne/StepOnePlus時(shí)請(qǐng)?jiān)O(shè)定在30sec。
 使用Roche LightCycler/LightCycler 480時(shí)請(qǐng)?jiān)O(shè)定在20 sec。
 使用ABI 7000和7300時(shí)請(qǐng)?jiān)O(shè)定在31 sec。
 使用ABI7500時(shí)請(qǐng)?jiān)O(shè)定在32 sec。

3．蓋上反應(yīng)管，輕柔混勻。可短暫離心，確保所有組分均在管底。
4．將反應(yīng)體系置于熒光定量PCR儀中，開始反應(yīng)。

進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)時(shí)的操作建議：
進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)時(shí)，有三種cDNA鏈合成試劑盒可以選擇，分別是QuickQuant RT Kit（with gDNase)（WH0098），Quant cDNA鏈合成試劑盒（WH0097)，和Baiscript cDNA鏈合成試劑盒（KR104)。與本產(chǎn)品配合使用，可以獲得可信性高的PCR反應(yīng)結(jié)果。

引物設(shè)計(jì)說(shuō)明：
進(jìn)行Real-time PCR反應(yīng)時(shí)，PCR引物的設(shè)計(jì)非常重要。設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增效率高，反應(yīng)特異性強(qiáng)的引物可以參考以下要求。
1．引物長(zhǎng)度：18-30個(gè)堿基。
2．GC含量：40-60%
3．Tm值：引物軟件都可以給出Tm，與引物長(zhǎng)度，堿基組成，引物使用緩沖的離子強(qiáng)度也有關(guān)。上下游引物的Tm值要盡量接近。簡(jiǎn)單的Tm計(jì)算公式為：Tm = 4℃（G + C)+ 2℃（A + T)。一般采用較引物Tm值低5℃作為PCR退火溫度。提高退火溫度可以增加PCR反應(yīng)的特異性。
4．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度zuì好在100-150 bp之間。盡量避開在模板的二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)域設(shè)計(jì)引物。避免上下游引物3"端之間形成2個(gè)或以上的互補(bǔ)堿基以減少引物二聚體的形成。引物3"端堿基不能有多于3個(gè)連續(xù)的G或C。引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，否則引物自身會(huì)折疊成發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)。避免引物3"末端堿基為T。引物序列中A、T、G、C要盡量均勻分布。

探針設(shè)計(jì)說(shuō)明：
請(qǐng)準(zhǔn)備適用于目的基因序列的熒光probe。Probe序列的設(shè)計(jì)請(qǐng)參考各Probe的設(shè)計(jì)指導(dǎo)。
另外，請(qǐng)盡可能使用HPLC級(jí)別以上純化的Probe，否則殘留的未結(jié)合的熒光染料會(huì)造成基線上飄從而降低檢測(cè)的靈敏度。

常見問(wèn)題：

1．低濃度模板時(shí)擴(kuò)增曲線混亂，熒光強(qiáng)度變?nèi)?br /> 反應(yīng)液中的目標(biāo)DNA拷貝數(shù)只有幾倍到幾十倍時(shí)，拷貝數(shù)散亂的概率變大，容易形成線性混亂。請(qǐng)適當(dāng)提高樣品濃度再進(jìn)行反應(yīng)。

原因	解決辦法
與引物二聚體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)	目的片段擴(kuò)增的同時(shí)出現(xiàn)引物二聚體的擴(kuò)增，由于競(jìng)爭(zhēng)使目的片段的擴(kuò)增反應(yīng)變?nèi)酢Ｕ?qǐng)摸索反應(yīng)條件或重新設(shè)計(jì)引物，以防止引物二聚體的形成。
DNA被反應(yīng)離心管吸附而損失	模板濃度較低或樣品稀釋后長(zhǎng)時(shí)間存放時(shí)，會(huì)導(dǎo)致DNA被反應(yīng)離心管吸附而損失。請(qǐng)?zhí)岣邩悠窛舛仍龠M(jìn)行反應(yīng)。如果對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，建議稀釋后立即進(jìn)行反應(yīng)。

2．NTC可見擴(kuò)增

原因	解決辦法
發(fā)生交叉污染	請(qǐng)更換新的試劑或滅菌水。仍無(wú)法得到改善時(shí)，請(qǐng)嘗試到新的實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行操作。
儀器設(shè)定誤差（進(jìn)行多重PCR時(shí)等）	當(dāng)使用幾種熒光探針時(shí)，請(qǐng)正確設(shè)定熒光測(cè)定，防止出現(xiàn)因不同染料的光譜交叉而導(dǎo)致的檢測(cè)信號(hào)差異。

3．定量值重現(xiàn)性差

原因	解決辦法
儀器方面的故障	因?yàn)閮x器的不適用，在溫度管理或檢測(cè)時(shí)產(chǎn)生重現(xiàn)性差。請(qǐng)根據(jù)相應(yīng)儀器的說(shuō)明書進(jìn)行點(diǎn)檢。
樣品純度不好	不純的樣品會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性差。
稀釋的模板放置太久	濃度較低的DNA溶液存放時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，由于被管壁吸附從而實(shí)際濃度會(huì)更低，建議從原液重新稀釋后再進(jìn)行反應(yīng)。另外，通過(guò)梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)樣品zuì好每次使用時(shí)直接從原液稀釋。
引物或探針質(zhì)量下降	盡量避免新合成引物批次間的差異，可以使用原來(lái)質(zhì)量好的引物做為對(duì)照。
PCR反應(yīng)條件、引物濃度、序列等不恰當(dāng)	擴(kuò)增效率差的PCR較容易產(chǎn)生重現(xiàn)性差。通過(guò)變更引物和探針的濃度或PCR反應(yīng)條件來(lái)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增不好時(shí)，一般可降低退火溫度或提高引物濃度，也可以延長(zhǎng)延伸時(shí)間。如模板的GC含量較高，可延長(zhǎng)變性時(shí)間。仍得不到改善時(shí)，建議重新設(shè)計(jì)引物和探針。
計(jì)量誤差	反應(yīng)體積太小會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)精度下降。請(qǐng)根據(jù)定量PCR儀推薦的反應(yīng)體積重新實(shí)驗(yàn)。

4．?dāng)U增效率低于90%（slope<-3.6）

原因	解決辦法
引物質(zhì)量不好	當(dāng)引物質(zhì)量不好時(shí)，會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率大幅下降?？蓮囊镌褐匦孪♂?，或重新合成引物。
計(jì)算擴(kuò)增效率時(shí)未排除偏離直線的Ct值	計(jì)算擴(kuò)增效率時(shí)包含了偏離直線的Ct值，增大了計(jì)算值的誤差。應(yīng)將偏離直線的Ct值排除后再計(jì)算。
反應(yīng)條件不合適	請(qǐng)優(yōu)化引物，探針濃度及PCR反應(yīng)條件。

5．?dāng)U增效率高于110%（slope>-3.1）

原因	解決辦法
計(jì)算擴(kuò)增效率時(shí)未排除偏離直線的Ct值	計(jì)算擴(kuò)增效率時(shí)包含了偏離直線的Ct值，增大了計(jì)算值的誤差。應(yīng)將偏離直線的Ct值排除后再計(jì)算。
樣品中的雜質(zhì)對(duì)高濃度模板抑制明顯	當(dāng)樣品含有雜質(zhì)時(shí)，對(duì)高濃度模板抑制明顯，從而增大了擴(kuò)增效率。請(qǐng)降低樣品濃度，或進(jìn)一步純化模板。

6．?dāng)U增曲線熒光信號(hào)很弱，或擴(kuò)增曲線呈鋸齒狀

原因	解決辦法
檢測(cè)光光譜設(shè)定誤差	由于目前不同熒光定量PCR儀的原理和提供的檢測(cè)光光譜范圍的差異，因此在選擇探針的發(fā)光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)時(shí)一定要根據(jù)所用的儀器型號(hào)設(shè)置的可檢測(cè)的熒光信號(hào)范圍內(nèi)選擇。請(qǐng)參照儀器的使用說(shuō)明書，重新確定參數(shù)設(shè)置。
熒光探針純度太低	請(qǐng)使用HPLC級(jí)別以上純化的Probe，否則殘留的未結(jié)合的熒光染料會(huì)造成基線上飄，從而導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物所產(chǎn)生的熒光值變低。
熒光探針質(zhì)量較差	由于探針保存中分解導(dǎo)致基線上飄，從而導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物所產(chǎn)生的熒光值變低。此外，一部分熒光染料不適合含有EDTA的buffer進(jìn)行保存。請(qǐng)按照Probe合成公司推薦的保存條件。
熒光采集時(shí)間太短	對(duì)部分儀器，需要更長(zhǎng)的延伸時(shí)間來(lái)充分采集熒光。擴(kuò)增曲線鋸齒狀較明顯時(shí)，將延伸時(shí)間設(shè)定為45-60 sec可得到改善。

根據(jù)您的關(guān)注的Real-Time PCR預(yù)混反應(yīng)液（探針?lè)?，探針?lè)ǎ琑eal-Time PCR預(yù)混反應(yīng)液（探針?lè)?，Real-Time PCR預(yù)混反應(yīng)液，qPCR試劑盒，熒光定量PCR預(yù)混反應(yīng)液，WH0104，百奧萊博，，，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：25mM氯化鎂溶液(PCR級(jí)MgCl2溶液)
貨號(hào)：BTN90302
規(guī)格：5mL
本產(chǎn)品為專門用于PCR的MgCl2，其濃度為25mM，可以用于調(diào)節(jié)MgCl2的zuì佳濃度。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

名稱：PCR級(jí)綠如藍(lán)DNA染料
貨號(hào)：BTN70909
規(guī)格：0.1mL
第二代的非飽和型熒光染料(如SYBR Green I)在高濃度下會(huì)抑制熒光PCR，所以反應(yīng)重復(fù)性很不穩(wěn)定，并且不能用于要求嚴(yán)格的Tm分析。本產(chǎn)品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一樣，是第三代飽和型熒光染料，在飽和濃度下也不抑制熒光PCR反應(yīng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 飽和濃度不抑制PCR反應(yīng)，因此得到的熒光信號(hào)更強(qiáng)。
2. 抗水解、抗熱解和抗光解的能力強(qiáng)于目前zuì常用的SYBR Green I。
3. 飽和濃度下染料分子沒(méi)有機(jī)會(huì)在DNA分子間發(fā)生移位，因此熒光強(qiáng)度跟DNA變性程度呈線性關(guān)系，可以用于精細(xì)的Tm 測(cè)定實(shí)驗(yàn)，如High-resolution melting curve analysis等。
4.跟目前常用的PCR 儀器(包括iCycler、LightCycler、ABI 測(cè)序儀)兼容。激發(fā)和發(fā)射光譜跟FAM和SYBR Green I 接近，可以使用SYBR Green I的光學(xué)設(shè)置參數(shù)。
5. 不能滲透進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，毒性和致突變性遠(yuǎn)低于SYBR Green I。
6.可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲線分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛細(xì)管電泳等研究。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸、-20℃避光保存，有效期一年。

使用方法：
先將本產(chǎn)品放置在室溫融化，然后震蕩10秒鐘，短暫離心后待用。下面以50μL的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系為例說(shuō)明其使用：

1.在一干凈的PCR 管中，加入下列成分：

試劑	加入量
10×PCR Buffer(No Mg2+)	5μl
MgCl2 50mM	2.5μl
dNTP 10mM	1μl
本產(chǎn)品(PCR級(jí)綠如藍(lán)染料)	2.5μl
Taq DNA聚合酶	1-5U
DNA模板	適量
PCR引物	5-50 pmol each
補(bǔ)水到	50μl

2. 放入熒光PCR 儀中進(jìn)行qPCR，并在退火或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)記錄熒光信號(hào)。使用的光學(xué)參數(shù)可以跟FAM或SYBR Green I 完全一樣。

注意事項(xiàng)：
1. 如果使用iCycler，可以不加FAM；如果使用ABI系統(tǒng)，需要在Well Inspector選項(xiàng)下的非特異參照中選擇“無(wú)”；使用LightCycler時(shí)，zuì好在PCR 體系中再加入終濃度為0.5mg/mL的BSA以降低儀器對(duì)染料和模板的非特異吸附。
2. 如果使用化學(xué)修飾過(guò)的Taq DNA聚合酶，可能需要減低KCl的濃度并提高Tris的濃度。

關(guān)注Real-Time PCR預(yù)混反應(yīng)液（探針?lè)?，探針?lè)ǎ琑eal-Time PCR預(yù)混反應(yīng)液（探針?lè)?，Real-Time PCR預(yù)混反應(yīng)液，qPCR試劑盒，熒光定量PCR預(yù)混反應(yīng)液，WH0104，百奧萊博，，的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：


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