高通量96孔板高純度質(zhì)粒提取試劑由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實驗研究等領(lǐng)域，我公司專注于DNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的高通量96孔板高純度質(zhì)粒提取試劑質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽和品牌形象。

特別提示：包括高通量96孔板高純度質(zhì)粒提取試劑盒（特異性吸附板法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：高通量96孔板高純度質(zhì)粒提取試劑盒（特異性吸附板法)
英文名稱：96wells High-purified Plasmid Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：WH0155
產(chǎn)品規(guī)格：4×96孔|24×96孔板

本試劑盒的96孔吸附板的膜采用了我公司硅基質(zhì)材料，能夠、專一的吸附質(zhì)粒DNA，zuì大限度去除蛋白及其他雜質(zhì)，從而保證提取質(zhì)粒的純度。每孔zuì多處理1.3ml高拷貝質(zhì)粒菌液，從中可快速提取多至5-10μg質(zhì)粒DNA（產(chǎn)量與質(zhì)?？截悢?shù)、細菌狀態(tài)等因素有關(guān)）。使用該試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可用于限制性酶切、測序、文庫篩選，連接和轉(zhuǎn)化等分子生物學(xué)實驗。

產(chǎn)品特點：
·提取速度快。
·配備了獨特的BaiRed試劑，可以清晰辨明抽提過程中樣本的裂解程度，確保得到率、高純度的質(zhì)粒DNA。
·純度高：可直接用于下游實驗。
·可用于高通量自動化核酸提取工作站。

提取實例：

使用本試劑盒處理1ml過夜培養(yǎng)的大腸桿菌（0)菌液（LB培養(yǎng)基)，平均得到5～6μg的高純度pBS質(zhì)粒。

組分	4板	24板
平衡液BL	240ml	3×500ml
溶液P1	125ml	3×240ml
溶液P2	125ml	3×240ml
溶液P3	160ml	4×250ml
去蛋白液PD	240ml	3×500ml
漂洗液PW	3×50ml	2×500ml
洗脫緩沖液TB	60ml	240ml
BaiRed	700μl	4×1ml
RNaseA（10mg/ml)	1.25ml	6×1.25ml
半裙邊96孔吸附板CP3	4個	24個
半裙邊96孔過濾板	4個	24個
96孔深孔板	16個	96個
250ml試劑瓶	-	1個
封口膜	16張	96張
透氣膜	5張	25張

儲存條件：室溫（15-25℃)干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀。溶液P1加入RNase A后，應(yīng)置于2-8℃保存，可穩(wěn)定保存12個月。單獨包裝的RNase A可在室溫保存12個月。

注意事項：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．96孔板細菌培養(yǎng)方法：將含相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基加入96孔深孔板中，每孔添加1.0-1.3ml培養(yǎng)基且挑取單克隆搖菌，加蓋透氣膜封板以防污染，在220-280rpm 37℃條件下培養(yǎng)20-24h。
2．溶液P1使用前先加入RNase A （請分批配制，每125 ml P1加入1.25 ml RNase A （10mg/ml），可用于4板提取反應(yīng)），混勻，置于2-8℃保存。
3．每次使用前取50 ml漂洗液PW并加入200 ml無水乙醇搖勻后使用。
4．使用前先檢查平衡液BL、溶液P2和P3是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，可置于37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。溶液P2和P3使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
5．所有離心步驟均為室溫下進行離心。
6．提取的質(zhì)粒量與細菌的培養(yǎng)濃度、宿主菌、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。
7．實驗前使用平衡液處理吸附板，可以zuì大限度激活硅基質(zhì)膜，提高得率。
8．用平衡液處理過的吸附板zuì好當(dāng)天使用，放置時間過長會影響提取效果。

BaiRed使用方法：
BaiRed是一種顏色指示劑，用以指示整個操作的正確性，不影響任何下游實驗且對人體無害。為可選試劑，客戶根據(jù)需求選擇是否添加。

使用方法：若選擇添加，則在使用之前按BaiRed:P1=1:200進行添加，顛倒混勻至完全勻相。在使用時添加BaiRed的P1溶液為紅色；添加P2之后紅色完全變?yōu)樽仙f明充分裂解；再添加P3溶液之后勻相狀態(tài)為黃色說明中和復(fù)性充分。

操作步驟：（離心法)
1．平衡96孔吸附板：將96孔吸附板CP3和96孔深孔板疊放在一起，向吸附板中每孔加入500μl的平衡液BL，3,600 rpm（～2,130×g)離心3 min，倒掉深孔板中的廢液，將吸附板重新放在深孔板上。（請使用當(dāng)天處理過的吸附板）。
2．集菌步驟：向一個新的96孔深孔板中添加1.0-1.3ml搖好的菌液（或者取搖好菌液的96孔板），加蓋封口膜，3,600 rpm（～2,130×g)離心10min收集菌體，倒掉培養(yǎng)基，倒扣于吸水紙上除去殘留的培養(yǎng)基（如果菌體濃度較低，可以重復(fù)集菌一次）。
3．向每孔收集好的細菌培養(yǎng)物中加入250 μl溶液P1 （請先檢查是否已加入RNase A)，加蓋封口膜，使用漩渦混合器徹底懸浮菌體。
  注意：若溶液P1添加BaiRed試劑，則此時為紅色。
4．揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入250 μl溶液P2，加蓋新的封口膜，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解，瞬時離心使封口膜上的水珠落回板中。
  注意：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，若使用BaiRed試劑，完全混勻時顏色為紫色，若裂解不充分會有部分紅色殘留?；靹蚝缶簯?yīng)變得清亮粘稠，所用時間不應(yīng)超過5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。
5．揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入350 μl溶液P3，加蓋新的封口膜，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使其充分混勻。
  注意：溶液P3加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。若使用了BaiRed試劑，完全混勻應(yīng)從紫色變?yōu)辄S色。
6．將96孔過濾板和一個新的96孔深孔板疊放在一起，取750 μl上步得到的裂解溶液轉(zhuǎn)入對應(yīng)的96孔過濾板中（過濾板的承載量為750 μl），3,600 rpm（～2,130×g)離心5 min。
7．將過濾液全部轉(zhuǎn)入第1步平衡好的96孔吸附板CP3中（96孔吸附板CP3疊放在收集廢液的96孔深孔板上），3,600 rpm（～2,130×g)離心5 min，倒掉深孔板中的廢液，將吸附板重新放在深孔板上。
8．可選步驟：向吸附板CP3每孔中加入500μl去蛋白液PD，3,600 rpm（～2,130×g)離心5min，倒掉深孔板中的廢液，將吸附板重新放在深孔板上。
  注意：如果宿主菌是end A＋宿主菌（TG1,BL21,HB101,JM系列等），這些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解質(zhì)粒DNA，強烈推薦采用此步。
     如果宿主菌是end A－宿主菌（DH5α，0等），這步可省略。
9．向96孔吸附板CP3每孔中加入700 μl漂洗液PW （請先檢查是否已加入無水乙醇），3,600 rpm（～2,130×g)離心5 min，倒掉收集板中的廢液。
10．重復(fù)操作步驟9。
11．將96孔吸附板CP3疊放在96孔深孔板上，置于3,600 rpm（～2,130×g)離心10min，目的是將吸附板中殘余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。
12．將吸附板CP3放入新的96孔深孔板中，使用排槍向96孔CP3吸附膜的中間部位懸空滴加80-100 μl洗脫緩沖液TB或ddH2O（pH≥7.5)，室溫放置5-6min，3,600 rpm（～2,130×g)離心10min將質(zhì)粒溶液收集到收集板中。
  注意：通常100 μl的洗脫液在洗脫后能回收到平均55 μl的DNA產(chǎn)物。為增加核酸的得率，可以適當(dāng)增加洗脫液的體積（比如采用120 μl洗脫液進行洗脫）。此外，洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。

操作步驟：（負壓法)
1．平衡96孔吸附板CP3：將96孔吸附板CP3放入負壓裝置中，每孔加入500μl的平衡液BL，開啟并調(diào)節(jié)負壓，抽掉吸附板中的溶液。（請使用當(dāng)天處理過的吸附板）
2．以下步驟同（一）離心法中的第2-5步驟操作方法。
3．接（一）離心法第5步驟之后，將96孔過濾板和第1步平衡好的96孔吸附板CP3疊放后置于負壓裝備上，過濾板每一個孔需對應(yīng)吸附板的每一個孔。
  注意：此步操作應(yīng)按照各種品牌的負壓裝置要求進行操作。
4．取上步得到的裂解溶液750 μl左右，轉(zhuǎn)入對應(yīng)的96孔過濾板中（過濾板的承載量為750μl），調(diào)節(jié)負壓抽干溶液。
5．可選步驟：向吸附板CP3每孔中加入500μl去蛋白液PD，調(diào)節(jié)負壓抽干溶液。
  注意：如果宿主菌是end A＋宿主菌（TG1,BL21,HB101,JM系列等），這些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解質(zhì)粒DNA，強烈推薦采用此步。如果宿主菌是end A－宿主菌（DH5α,0等），這步可省略。
6．向96孔吸附板CP3每孔中加700 μl漂洗液PW，調(diào)節(jié)負壓抽干溶液。
7．重復(fù)步驟6。
8．使用zuì大負壓繼續(xù)抽10min，以徹底抽干吸附材料中殘余的漂洗液。若柱尾仍然含有水珠用吸水紙吸干即可。
9．將吸附板CP3放入一個新的96孔深孔板中，使用排槍向96孔CP3吸附膜的中間部位懸空滴加80-100 μl洗脫緩沖液TB或ddH20（pH≥7.5)，室溫放置5-6 min，3,600 rpm（～2,130×g)離心10min將質(zhì)粒溶液收集到深孔板中。

DNA濃度及純度檢測：
1．DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。
2．DNA應(yīng)在OD₂₆₀處有顯著吸收峰，OD₂₆₀值為1相當(dāng)于大約雙鏈DNA 50 μg/ml、單鏈DNA40 μg/ml。OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)為1.7-1.9。

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名稱：柱式分枝桿菌DNA提取試劑盒
貨號：BTN70703
規(guī)格：50次
分枝桿菌屬(Mycobacterium)是為古老的細菌，與人類的疾病相關(guān)的就有25種以上，包括引起結(jié)核病的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年來由于多重耐藥性分枝桿菌的出現(xiàn)，分枝桿菌再次成為人們關(guān)心的細菌。PCR快速診斷是目前檢測分枝桿菌的主流方法，但由于此類細菌具有十分獨特的堅硬的細胞壁，快速提取其基因組DNA一直是十分棘手的技術(shù)問題。本產(chǎn)品就是為解決這一問題而開發(fā)。

試劑盒特點：
1. 操作簡單，客戶不需要準(zhǔn)備額外的試劑。
2. PCR檢測靈敏度一般在10-100CFU/mL樣品。
3. 既可以使用培養(yǎng)的細菌，也可以使用痰液、精液、血液、腦脊液等樣品。
4. 價廉物美，與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當(dāng)，但價格。
5. 安全，本試劑盒對人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
化痰液	100ml
溶液A	7.5ml
溶液B	15ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脫液2.0	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：文獻報道部分分枝桿菌在DNA提取過程中還有形成菌落的能力，所以任何丟棄的溶液都必須按有傳染性的污染物品對待，并嚴格按有關(guān)部門要求進行消毒處理。

一:培養(yǎng)的分枝桿菌樣品的預(yù)處理
1. 刮取培養(yǎng)的分枝桿菌到0.5mL自備TE緩沖液中。
2. 80℃放置20分鐘以殺滅細菌。
3. 3000 g室溫離心15分鐘，棄上清。
4.細菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進入細菌基因組DNA提取步驟。
二:含分枝桿菌的痰液樣品的預(yù)處理
1. 將需要處理的痰液樣品加入到干凈的10mL或15mL塑料離心管中。
2. 加入等體積的化痰液，充分混合均勻后室溫放置15-30分鐘。如果痰很濃，可以延長保溫時間。
3. 3000 g室溫離心15分鐘，棄上清。
4.細菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進入細菌基因組DNA提取步驟。
三:含分枝桿菌的血液樣品的預(yù)處理
1. 用自備紅細胞裂解液對血液進行紅細胞裂解處理，具體操作見百奧萊博紅細胞裂解液(BTN60403)使用手冊。
2. 將得到的白細胞沉淀-20℃或更低溫度放置10分鐘。
3. 迅速將得到的白細胞沉淀100℃加熱10分鐘。
4.上述處理將使大部分白細胞破裂，加入自備的TE或PBS緩沖液,直到離心管體積的一半位置。此步使白細胞的DNA進入緩沖液中。
5.離心5-10分鐘沉淀細菌，離心速度取決于離心管的大小。如果樣品在1.5mL離心管，則可以12000～15000g室溫離心。如果樣品在10-15mL離心管，則3000-5000g室溫離心。
6. 吸棄上清(含白細胞DNA)后所得細菌沉淀可以放-20℃冰箱備用或直接進入細菌基因組DNA提取步驟。
四:細菌基因組DNA的提取
1. 將150μl 65℃預(yù)熱過的溶液A加到有細菌沉淀的離心管中，充分震蕩混勻。
2. 將細菌和溶液A的混合物轉(zhuǎn)移到一個干凈的1.5mL塑料螺旋蓋離心管中。強烈建議不要使用壓蓋式塑料離心管，否則后面處理過程中溶液容易漏出。
3. 加入300μl溶液B和300μl自備lǜ仿，充分震蕩混勻。
4. -20℃放置直到液體凝固，一般需要20-60分鐘。過夜放置也可。
5. 放室溫融化后振蕩半分鐘。
6. 12000～15000g室溫離心3～5分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。
7. 12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 加入0.5mL通用洗柱液 12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 重復(fù)第8步的洗滌過程一次。
10. 短暫離心半分鐘。此步不要省略，否則殘留的洗柱液(含乙醇)將會影響DNA電泳、酶切和PCR等反應(yīng)。
11. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的離心管中，加入30-100μL DNA洗脫液2.0，12000～15000g室溫離心半分鐘，所得溶液即基因組DNA。

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