培養環境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養操作
換液周期 2-3天
培養基體積 T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
傳代比例 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定)
傳代方法 1.盡量吸干凈T25瓶原培養基;
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動培養瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層;
4.將培養瓶放入37度培養箱消化;
5.消化到細胞間隙變大,但未完全脫落時加2-3ml完全培養基終止胰酶消化;
6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
7.加新的完全培養基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養瓶里;
8.補足完全培養基,將培養瓶放回培養箱靜置培養;
注意事項 不同品牌胰酶消化時間差別較大,注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。
三、細胞凍存操作
凍存液配方 92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%完全培養基+8%DMSO(高手建議);
凍存規格 200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法 1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞;
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管;
3.將凍存管轉入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,第二天轉入液氮保存
注意事項 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案
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