B16動物細胞小鼠黑色素瘤細胞
B16動物細胞小鼠黑色素瘤細胞
B16動物細胞小鼠黑色素瘤細胞
-----尚恩生物 186278592O3-----
一、細胞基本屬性
細胞名稱：小鼠黑色素瘤細胞
細胞別稱：B16; B-16; B16 melanoma; B16 subline B78; B78
細胞貨號：SNL-115
細胞種屬：小鼠
生長情況：貼壁
培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養(yǎng)操作
換液周期 2-3天
培養(yǎng)基體積 T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細胞間隙變大，但未完全脫落時加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項 不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。
三、細胞凍存操作
凍存液配方 92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);
凍存規(guī)格 200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 1. 離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2. 將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案
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