His標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多His標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。

特別提示：包括His標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：His標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱
英文名稱：Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML
產(chǎn)品貨號：SY0394
產(chǎn)品規(guī)格：5ml|5×5ml

Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過化學(xué)方法偶聯(lián)四配位的氮川三乙酸（NTA）為配體，螯合鎳離子（Ni2+）后，形成非常穩(wěn)定的八面體結(jié)構(gòu)，鎳離子處于八面體的中心，這樣的結(jié)構(gòu)可保護(hù)鎳離子免受小分子的進(jìn)攻，更加穩(wěn)定，可以耐受一定濃度的還原劑、變性劑或耦合劑等苛刻條件。此外，因其基質(zhì)的耐壓性（該基質(zhì)可以耐受zuì高0.3 MPa的壓力），該產(chǎn)品可以用于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化，可在相對較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對目的蛋白的純化。

Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一種以Ni-NTA Agarose Resin 6FF為填料的中壓預(yù)裝柱，該預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如?KTA等，方便客戶用于純化His-tag蛋白。

基質(zhì)（Matrix）：高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠
孔徑（Bead size）：45-165μm
載量（Capacity）：＞40mg 6×His-tagged protein/ml 基質(zhì)
耐壓（Tolerance Pressuremax）：0.3MPa, 3bar
儲存緩沖液：含20%乙醇的1×PBS
柱子尺寸（Column Size）：0.7×2.5cm（1ml）
儲存條件：4℃保存，有效期2年

注意事項(xiàng)
1）建議純化所用緩沖液和蛋白溶液經(jīng)0.22μm或0.45μm濾膜過濾后上柱使用。
2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法
（一）純化流程

1 緩沖液的準(zhǔn)備
緩沖液使用原理：低咪唑上樣，高咪唑洗脫，或者高pH上樣，低pH洗脫。Buffer 在使用前zuì好用0.22μm或0.45μm濾膜過濾除菌。可溶性組氨酸標(biāo)簽蛋白純化所需配方詳見附表1。包涵體組氨酸標(biāo)簽蛋白純化所需緩沖液及配方詳見附表2。

2 樣品準(zhǔn)備
2.1 細(xì)菌表達(dá)的蛋白（本說明以細(xì)菌表達(dá)蛋白為例）
1）挑取單菌落到含有適合抗性的LB培養(yǎng)基中，根據(jù)載體說明加入相應(yīng)的誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)相應(yīng)的時(shí)間。
2）表達(dá)結(jié)束后，將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)至離心瓶，7000rpm，離心15min，收集菌體，然后加入1/10體積的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其終濃度為1mM），同時(shí)也可加入其他蛋白酶抑制劑，但不能影響目的蛋白與樹脂的結(jié)合。
3）之后加入溶菌酶，使其工作濃度為1mg/ml?！咀ⅰ浚喝绻磉_(dá)的宿主細(xì)胞內(nèi)含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
4）將菌體沉淀懸浮起來（如果菌液濃度高，可考慮加入10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I），混勻，置于冰上超聲破碎細(xì)胞，至菌液基本保持澄清。
5）收集上述澄清蛋白液，10000rpm，4℃離心20-30min。取上清，0.22μm/0.45μm濾膜過濾后，置于冰上備用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆蟲和哺乳細(xì)胞分泌表達(dá)的可溶性蛋白
將細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心瓶，5000rpm離心10min，收集上清。如上清中不含EDTA、組氨酸和還原劑等，即可直接上柱純化；如含有EDTA、組氨酸和還原劑等物質(zhì)，則需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】：對于大量體積的上清，需加入硫酸銨進(jìn)行沉淀濃縮，之后經(jīng)1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵體蛋白純化（以細(xì)菌為例）
1）將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心瓶，7000rpm，離心15min，收集菌體去上清。
2）按照菌體：裂解液=1:10（w/v）的比例將菌體充分懸浮，混勻，冰浴超聲破碎。
3）將破碎液轉(zhuǎn)移至離心管，10000rpm，4℃離心20-30min，去上清?？芍貜?fù)步驟2）和3）一次。
4）按照菌體：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例將包涵體充分懸浮。
5）變性條件下純化His標(biāo)簽蛋白純化。

3 樣品純化（以AKTA使用為例）
1）將泵管道注滿去離子水。去掉產(chǎn)品上塞，連接至色譜系統(tǒng)中，再折斷下口，將預(yù)裝柱連接到色譜系統(tǒng)中，注意旋緊。
2）3-5倍柱體積去離子水沖洗出存儲緩沖液。
3）至少5倍柱體積的Lysis Buffer 平衡色譜柱。推薦流速為5ml/min。
4）利用泵或注射器上樣?！咀ⅰ浚喝魳悠氛扯仍黾樱词股蠘芋w積很少也會導(dǎo)致層析柱很大的反壓；上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力；大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。
5）Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收達(dá)到一個穩(wěn)定的基線（一般至少10-15個柱體積）?！咀ⅰ浚涸跇悠泛徒Y(jié)合緩沖液中加入低濃度咪唑可以提高樣品純度。
6）Elution Buffer一步法或梯度法進(jìn)行洗脫。一步法洗脫中一般5倍柱體積洗脫液即可。梯度洗脫可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積或更多來分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。
7）建議用更高濃度咪唑（如500mM）徹底清洗純化柱上結(jié)合的雜蛋白。隨后依次用3倍柱體積的Lysis Buffer和5倍柱體積的去離子水清洗樹脂。5倍柱體積的20%乙醇平衡樹脂，zuì后將樹脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

4 SDS-PAGE檢測
將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測，判定其純化效果。

（二）在位清洗
當(dāng)填料使用過程中發(fā)現(xiàn)反壓過高（＞0.5Mpa）或者填料上面出現(xiàn)明顯的污染時(shí)，需對其進(jìn)行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗時(shí)，先把Ni2+脫掉，清洗結(jié)束后，將填料保存在20%乙醇中，后者重新掛Ni后再保存在20%乙醇中。建議按照下面操作去除填料上殘留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除強(qiáng)疏水結(jié)合的蛋白，脂蛋白和脂類
使用30%異丙醇清洗5-10個柱體積，接觸時(shí)間為15-20min可以去除此類污染物。之后再用去離子水清洗10倍柱體積。也可以選擇使用含有去污劑的酸性或者堿性溶液清洗填料2倍柱體積。例如含有0.1-0.5%非離子去污劑的0.1M醋酸溶液，接觸時(shí)間為1-2h。去污劑處理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱體積，徹底去除去污劑。zuì后利用去離子水清洗10倍柱體積。
2 去除離子作用結(jié)合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接觸10-15min，之后用去離子水清洗10倍柱體積。

（三）填料再生
當(dāng)填料使用過程中發(fā)現(xiàn)反壓過高（＞0.5Mpa），填料上面出現(xiàn)明顯的污染，或填料載量明顯變低時(shí)，需要對其進(jìn)行鎳離子剝離及重新掛鎳處理，即填料再生。按照下面操作流程進(jìn)行：
1）使用0.2M 醋酸溶液（含6M GuHCl）清洗2倍柱體積；
2）去離子水清洗5倍柱體積；
3）2%SDS清洗3倍柱體積；
4）去離子水清洗5倍柱體積；
5）乙醇清洗5倍柱體積；
6）去離子水清洗5倍柱體積；
7）100mM EDTA（pH 8.0）清洗5倍柱體積；
8）去離子水清洗5倍柱體積；
9）100mM NiSO4清洗5倍柱體積；
10）去離子水清洗10倍柱體積。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃?zhèn)溆谩?br />
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名稱：8M鹽酸胍溶液
貨號：BTN131120
規(guī)格：250mL
本產(chǎn)品為即用型鹽酸胍溶液?？煽焖俸喴椎闹苽?M以下的任意濃度，無需花費(fèi)更多寶貴的實(shí)驗(yàn)時(shí)間處理難以稱量的晶體緩慢制備鹽酸胍溶液，本產(chǎn)品不含225-300nm處具有紫外吸收的物質(zhì)，不含醛類，具有的穩(wěn)定性，無顆粒物，是一種透明似水晶的溶液。經(jīng)檢測，本產(chǎn)品具有鮮明的紫外截?cái)喙庾V，OD260小于0.03；典型的金屬含量：銅＜0.02ppm，鋅＜0.15ppm，鐵＜0.25ppm，鉛＜0.005ppm。

儲存條件：常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。

名稱：預(yù)染蛋白Marker(43～200kD)
貨號：BTN70704B
規(guī)格：10次
本產(chǎn)品為蛋白質(zhì)電泳標(biāo)準(zhǔn)系列，是預(yù)染成藍(lán)色的數(shù)個標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的混合物，在SDS-PAGE時(shí)和轉(zhuǎn)膜后可以作為分子量標(biāo)準(zhǔn)，粗略估計(jì)其他蛋白質(zhì)的分子量大小。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．提供干粉型或溶液型，即開即用，非常方便。
2．預(yù)染色，在電泳過程中可以觀察蛋白質(zhì)的泳動，也可以監(jiān)測轉(zhuǎn)膜效果。
3．可用于SDS-PAGE和Western Blot等實(shí)驗(yàn)。
4．本系列兩種產(chǎn)品涵蓋從14.4kD-200kD的分子量范圍，單次上樣，每個條帶的濃度約為0.2μg/μL。

產(chǎn)品組成：

成分	A型	B型
預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)(低分子量)	20T	-
預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)(高分子量)	-	10T
1×SDS-PAGE上樣液	0.5ml	0.5ml
說明書	1份	1份

儲存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、干粉型的使用
1．開封后將1×SDS-PAGE上樣液加入到樣品管中溶解蛋白質(zhì)粉末，各分子量標(biāo)準(zhǔn)所需的1×SDS-PAGE上樣液的體積如下:
低分子量標(biāo)準(zhǔn)(BTN70704A)需要200μL。
中分子量標(biāo)準(zhǔn)(BTN70704B)需要100μL。
2．低分子量標(biāo)準(zhǔn)(BTN70704A)沸水浴中加熱5分鐘，短暫離心后將溶液按每管10μL的體積分裝到多個塑料離心管中，置-20℃長期保存。
中分子量標(biāo)準(zhǔn)(BTN70704B)待完全溶解后，直接按每管10μL的體積分裝到多個塑料離心管中，置-20℃長期保存。
3．使用時(shí)每次取一管，低分子量標(biāo)準(zhǔn)(BTN70704A)室溫放置直到液體融化后即可上樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳。中分子量標(biāo)準(zhǔn)(BTN70704B)需要在使用前65℃保溫5分鐘，然后上樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳。BTN70704A型推薦使用12%的分離膠、BTN70704B推薦使用8%的分離膠。
4．電泳后進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)G-250染色，染色后出現(xiàn)的帶型見上表。

二、溶液型的使用
1．將溶液按每管一次電泳的用量分裝到塑料離心管中凍存，每次只用一管，這樣避免反復(fù)凍融。
2．使用時(shí)取一管室溫放置直到液體融化。
3．沸水浴中加熱3～5分鐘后趁熱上樣并進(jìn)行SDS-PAGE電泳。BTN70704A型推薦使用12%的分離膠、BTN70704B推薦使用8%的分離膠。
 電泳后進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)G-250染色，染色后SDS-PAGE膠上將可見6條蛋白帶(對BTN70704A)或6條蛋白帶(對BTN70704B)，但由于共價(jià)結(jié)合了染料分子，各預(yù)染蛋白的分子量均稍大于染色前的蛋白，所以如果不需要估算未知蛋白的分子量，一般以染色前的各蛋白質(zhì)的分子量作為參考。如果需要估算未知蛋白的分子量，則必須使用非預(yù)染蛋白電泳標(biāo)準(zhǔn)系列產(chǎn)品(BTN70102)，以避免誤差。

本系列產(chǎn)品所含成分及分子量分布

分子量范圍		低分子量	高分子量
肌球蛋白重鏈	200kD		有
鈣調(diào)素結(jié)合蛋白	130kD		有
兔磷酸化酶B	97.4kD	有	有
牛血清白蛋白	66.2kD	有	有
兔肌動蛋白	43kD	有	有
牛碳酸酐酶	31kD	有
人生長激素	22kD	有
大豆胰蛋白酶抑制劑A	20.1kD
雞蛋清溶菌酶	14.4kD	有

關(guān)注His標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，His標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，SY0394，百奧萊博，，的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：


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