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解析為何純化蛋白與人血清蛋白分子量不一樣

發布時間:2019-07-18瀏覽次數:1364返回列表

  蛋白質作為生命活動中起重要作用的生物大分子,與一切揭開生命奧秘的重大研究課題都有密切的關系。蛋白質是人類和其他動物的主要食物成分,高蛋白膳食是人民生活水平提高的重要標志之一。以下針對純化蛋白與人血清蛋白分子量不一樣作分析:

客戶問:

用大腸桿菌表達純化的蛋白,和人血清中這種蛋白的分子量不同,western顯示血清中這種蛋白的分子量高于純化的蛋白,請問如何解釋呢?

技術答:

1  可能人血清中的蛋白是被修飾了的,如糖基化以及其他可以影響分子量的修飾。不知道血清中的分子量比你純化的大多少KD?

2  檢查一下蛋白序列中有沒有糖基化位點。大腸桿菌不能糖基化。

3  不知道如何確定是否用糖基化位點呢?血清中分子量比純化的高個2~3kd吧,這是糖基化么?

4  N即Asparagine Asp
X即任意氨基酸
T即Threonine Thr
S即Serine Ser
NXT NXS即在氨基酸一級結構中有Asp-X-Thr或Asp-X-Ser序列則會被糖基化。
查文獻我建議可查其蛋白質性質研究方面的文獻,或以蛋白+糖基化作關鍵詞嘗試查詢。你關注生物活性時可不能忽略糖基化這一點哦,往往糖基化是很多蛋白折疊和實現活性的重要因素。

5  糖基化分三種,N糖基化有特殊識別序列N-X-S/T,O糖基化發生位點迄今尚無明確規律,糖基磷脂酰肌醇錨定一般是定位在細胞膜上,可能血清中的蛋白是沒有的。由于糖基化不是由模板合成,表現出微觀不均一性,因此其分子量是有一定變化。
  一般可預測N糖基化位點,如果存在N-X-S或N-X-T序列,則基本上都是要被糖基化的。zui好能查找一下相關文獻,如果你做的蛋白是已知的,一般都會有文獻報道糖基化分三種,N糖基化有特殊識別序列N-X-S/T,O糖基化發生位點迄今尚無明確規律,糖基磷脂酰肌醇錨定一般是定位在細胞膜上,可能血清中的蛋白是沒有的。由于糖基化不是由模板合成,表現出微觀不均一性,因此其分子量是有一定變化。
  一般可預測N糖基化位點,如果存在N-X-S或N-X-T序列,則基本上都是要被糖基化的。zui好能查找一下相關文獻,如果你做的蛋白是已知的,一般都會有文獻報道。。

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