特別提示:包括10×CAPS電轉(zhuǎn)移緩沖液(不含甘氨酸,適合大分子量蛋白轉(zhuǎn)移)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:10×CAPS電轉(zhuǎn)移緩沖液(不含甘氨酸,適合大分子量蛋白轉(zhuǎn)移)
產(chǎn)品貨號:KFS094
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
本產(chǎn)品作為蛋白電泳完畢后,將凝膠上蛋白電轉(zhuǎn)移到PVDF 膜或其它膜上的緩沖液,pH11,含CAPS,不含有甘氨酸,本電泳緩沖液適合大分子量蛋白電轉(zhuǎn)移。
使用時按10×電轉(zhuǎn)移緩沖液:甲醇:蒸餾水=1:1:8 的比例配制成1×的工作液,就可以用于電轉(zhuǎn)移實驗。
儲存:RT,有效期一年。
根據(jù)您的關(guān)注的
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名稱:蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(14.4-116kD)
貨號:YT627
規(guī)格:200μl|1ml
本品包含了從14.4kD到116kD共7種純化的蛋白質(zhì)(見下圖),適合作為SDS-PAGE的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。一個包裝的本產(chǎn)品后續(xù)如果用于考馬斯亮藍(lán)染色,大約可以使用約20-40次。
產(chǎn)品特點:
1. 本蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)配制在1X SDS-PAGE上樣緩沖液中,可以直接使用。
2. 根據(jù)上樣孔的大小,本蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)通常每次上樣5-10微升,就可以用染色觀察到非常清楚的蛋白條帶。

本蛋白Marker包含7個條帶:14.4kD,18.4kD,25kD,35kD,45kD,66.2kD,116kD
注意事項:
1. 本蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)用1X SDS-PAGE上樣緩沖液配制,不適用于非變性PAGE膠。
2. Western實驗時,建議使用百奧萊博的彩色預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)(YT621、YT622),以便更好地觀察轉(zhuǎn)膜效果。
儲存條件:-20℃,有效期一年。
名稱:Protein G瓊脂糖凝膠
貨號:WE0270
規(guī)格:5ml
本產(chǎn)品為Protein G與Sepharose偶聯(lián)后產(chǎn)物,可從血清,腹水,細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞抽提物中分離和純化多種哺乳動物丌同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。Protein G是鏈球菌(group C和G)細(xì)胞表面蛋白。它不Protein A類似,通過不免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,可結(jié)合大多數(shù)哺乳動物的IgG。但兩者結(jié)合特異性有所丌同。Protein G對人IgG3,小鼠IgG1,大鼠IgG2a等具有高親和力。天然Protein G具有白蛋白和細(xì)胞表面結(jié)合域。重組Protein G去除了白蛋白和細(xì)胞表面結(jié)合域,以減少非特異性結(jié)合。本產(chǎn)品具有廣譜 IgG結(jié)合、高Fc段結(jié)合活性、高抗體吸附量和性能穩(wěn)定等特點,可重復(fù)多次使用。
注意事項:
1、凝膠從冷室或冰箱中取出后在室溫下緩慢振搖恢復(fù)到室溫后裝柱,避免產(chǎn)生氣泡影響柱效。
2、裝柱時盡可能維持凝膠長徑比為5:3-2:1,長徑比過大將導(dǎo)致洗脫峰拖尾,洗脫體積增大;長徑比過小將導(dǎo)致樣品與填料接觸時間短,吸附不充分,填料吸附蛋白量小。
3、若上樣液中抗體濃度過高,應(yīng)使用平衡緩沖液稀釋至1-2 mg/ml,以免上樣濃度過高影響柱效。
4、可以采用降低上樣時的流速來增加樣品與填料接觸時間從而提高純化抗體量。
5、凝膠用低pH緩沖液洗脫時間應(yīng)盡可能短,洗脫后用中性緩沖液盡快中和至pH中性,以延長親和介質(zhì)的使用壽命。
6、洗脫后,應(yīng)立刻用如中和緩沖液將收集到的抗體溶液中和到中性(pH7.4左右),以利于維持抗體的生物活性,避免抗體失活。
7、填料使用后應(yīng)用0.1 M檸檬酸鈉緩沖液(pH3.0)做再生處理,長期采用端的洗脫條件將縮短親和介質(zhì)的使用壽命。
使用方法:
I 緩沖液的準(zhǔn)備
1、平衡緩沖液:20 mM PBS,150 mM NaCl,pH7.4-8.5。
2、洗脫緩沖液:0.1 M Glycine,pH2.5-3.0。
3、再生緩沖液:1 M NaCl。
4、中和緩沖液:1 M Tris-Cl,pH9.0。
注意:
1)以上緩沖液使用前均需0.45μM濾膜過濾。
2)為提高抗體和介質(zhì)的吸附力。可適當(dāng)提高平衡緩沖液中的鹽濃度和ph值。
II 樣本制備
1、樣品用平衡緩沖液稀釋5-10倍。
2、細(xì)胞培養(yǎng)液中大量的血清蛋白會對親和層析造成一定的干擾,去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體收率。
注意:樣品在上柱前需0.45μM微孔濾膜過濾。
III
操作步驟
1、將Protein G-Sepharose填料混勻后加入層析柱,室溫靜置10分鐘,待凝膠與溶液分層后,把底部的出液口打開,讓乙醇通過重力作用緩慢流出。
2、向裝填后的柱中加入3-5個柱床體積的超純水將乙醇沖洗干凈,用平衡緩沖液流洗5-10個柱床體積平衡柱子。
3、將樣品上柱,上樣流速60 cm/h。
4、平衡緩沖液再洗5-10個柱床體積,直至基線平穩(wěn)。
5、洗脫緩沖液洗脫,收集洗脫峰,用中和緩沖液將洗脫收集樣品中和到中性。
6、立即用5-10個柱床體積平衡緩沖液平衡柱子到中性。
7、再生緩沖液流洗3-5個柱床體積。先后用純水、20%乙醇分別流洗3-5個柱床體積。柱子置于2~8℃保存。
注意:操作中如果沒有實時的蛋白監(jiān)測系統(tǒng),收集洗脫峰時可以分階段收集到多個管中,zuì后根據(jù)測定結(jié)果重新調(diào)整收集方式。
8、本產(chǎn)品使用10次以上后先用20%乙醇洗5個柱床體積,再用70%乙醇洗脫5-10個柱床體積,再用20%乙醇流洗3-5個柱床體積。柱子置于2~8℃保存。
儲存條件:2~8℃,避免冷凍
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關(guān)注
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