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電泳緩沖液的特點是什么?有什么作用?
發布時間：2023-11-07瀏覽次數：813返回列表
電泳緩沖液的特點是什么?有什么作用?
電泳緩沖液是核酸、蛋白質凝膠電泳系統的一個重要組成， 是電泳場中的導體，也是維持電泳系統恒定 pH值的必要條件。常見的核酸電泳緩沖液有:TAE、TBE、TPE和MOPS等。
電泳緩沖液的特點：
1.TAE是使用緩沖系統。其特點是超螺旋在其中電泳時符合實際相對分子質量(TBE中電泳時測出的相對分子質量會大于實際分子質量)，且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得好的分離效果，此外，回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統進行電泳。TAE的缺點是緩沖容量小，長時間電泳(如過夜)不可選用，除非有循環裝置使兩極的緩沖液得到交換。
2.TBE的特點是緩沖能力強，長時間電泳時可選用TBE，并且當用于電泳小于1kb的片段時分離。TBE用于瓊脂糖凝膠時易造成高電滲作用，并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價結合的四羥基硼/酸鹽復合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收電泳中使用。
3.TPE的緩沖能力也較強，但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的電泳中使用。
電泳緩沖液的作用：
1.緩沖液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH。電泳時陽極與陰極都會發生電解反應，陽極發生的是氧化反應(4OH--4e->2H2O+O2)，陰極發生的是還原反應(4H++4e->2H2)，長時間的電泳將使陽極變酸，陰極變堿。一個好的緩沖系統應有較強的緩沖能力，使溶液兩極的pH保持基本不變。
2.電泳緩沖液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性，以利于DNA分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應含有0.01-0.04mol/L的Na+離子，Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢;太高時就會造成過大的電流使膠發熱甚至熔化。
3.電泳緩沖液還有一個組分是EDTA，加入濃度為1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等離子，防止電泳時激活 DNA酶，此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。
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