特別提示：包括His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒
英文名稱：His-tag Protein Purification Kit
產(chǎn)品貨號：YT046
產(chǎn)品規(guī)格：10ml
本試劑盒是一種采用了His-tag蛋白純化樹脂(YT616)的可以兼容還原劑和螯合劑，并能簡單、快速、并且高特異性地純化His標(biāo)簽蛋白的試劑盒。試劑盒提供了His標(biāo)簽蛋白所需的相關(guān)試劑和親和層析空柱管，為His標(biāo)簽蛋白的純化帶來了大的便利。
一個包裝的本產(chǎn)品zuì多可純化10種帶有His標(biāo)簽重組蛋白，每種蛋白的zuì大純化量為10-15mg。對于分子量為50kD的帶有His標(biāo)簽重組蛋白，一個包裝的本產(chǎn)品實際zuì多可純化10種約3-10mg的蛋白。在不使用親和層析空柱管的情況下，參考本說明書本試劑盒足夠進(jìn)行500次的小量His標(biāo)簽蛋白純化。
His-tag蛋白純化樹脂————10ml
非變性裂解液————120ml
非變性洗滌液————60ml
非變性洗脫液————60ml
溶菌酶———————60mg
親和層析空柱管(3毫升)————10套
注意事項：
1. 請勿在-20℃或更低溫度冷凍保存His-tag蛋白純化樹脂。
2. His-tag蛋白純化樹脂使用過程中，緩沖試劑如Tris、HEPES、MOPS等的濃度不宜超過100mM，EDTA濃度不宜超過20mM，SDS和sarkosyl的濃度不宜超過0.3%，Triton、Tween、NP-40的濃度不宜超過2%，脫氧膽酸鈉、CHAPS的濃度不宜超過1%，組氨酸濃度不宜超過20mM，鈣離子濃度不宜超過5mM，鈉離子和鎂離子濃度可以高達(dá)2M，甘油濃度可以高達(dá)50%。其它未提及試劑的兼容性可以參考上述試劑，但還有待實驗驗證。
3. His-tag蛋白純化樹脂保存和純化過程中應(yīng)始終保持凝膠濕潤。
4. 若離心不能完全除去蛋白樣品中的不溶物，可以將樣品溶液用0.45μm的濾膜過濾。
5. 蛋白樣品收集后宜盡快完成純化工作，并應(yīng)始終放置在4℃或冰浴，以減緩蛋白降解。為有效抑制蛋白降解，可以在裂解液中添加適量的蛋白酶抑制劑混合物。
6. 若使用本說明書提供的條件無法達(dá)到理想的純化效果，可嘗試改變洗滌液和洗脫液中咪唑的濃度和(或)pH，以達(dá)到zuì優(yōu)效果。
儲存條件：4℃，有效期一年。
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儲存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。
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儲存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。
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注意事項：
1、凝膠從冷室或冰箱中取出后在室溫下緩慢振搖恢復(fù)到室溫后裝柱，避免產(chǎn)生氣泡影響柱效。
2、裝柱時盡可能維持凝膠長徑比為5:3-2:1，長徑比過大將導(dǎo)致洗脫峰拖尾，洗脫體積增大；長徑比過小將導(dǎo)致樣品與填料接觸時間短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3、若上樣液中抗體濃度過高，應(yīng)使用平衡緩沖液稀釋至1-2 mg/ml，以免上樣濃度過高影響柱效。
4、可以采用降低上樣時的流速來增加樣品與填料接觸時間從而提高純化抗體量。
5、凝膠用低pH緩沖液洗脫時間應(yīng)盡可能短，洗脫后用中性緩沖液盡快中和至pH中性，以延長親和介質(zhì)的使用壽命。
6、洗脫后，應(yīng)立刻用如中和緩沖液將收集到的抗體溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
7、填料使用后應(yīng)用0.1 M檸檬酸鈉緩沖液(pH3.0)做再生處理，長期采用端的洗脫條件將縮短親和介質(zhì)的使用壽命。
使用方法：
I 緩沖液的準(zhǔn)備
1、平衡緩沖液：20 mM PBS，150 mM NaCl，pH7.4-8.5。
2、洗脫緩沖液：0.1 M Glycine，pH2.5-3.0。
3、再生緩沖液：1 M NaCl。
4、中和緩沖液：1 M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1)以上緩沖液使用前均需0.45μM濾膜過濾。
2)為提高抗體和介質(zhì)的吸附力?？蛇m當(dāng)提高平衡緩沖液中的鹽濃度和ph值。
II 樣本制備
1、樣品用平衡緩沖液稀釋5-10倍。
2、細(xì)胞培養(yǎng)液中大量的血清蛋白會對親和層析造成一定的干擾，去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體收率。
注意：樣品在上柱前需0.45μM微孔濾膜過濾。
III
操作步驟
1、將Protein G-Sepharose填料混勻后加入層析柱，室溫靜置10分鐘，待凝膠與溶液分層后，把底部的出液口打開，讓乙醇通過重力作用緩慢流出。
2、向裝填后的柱中加入3-5個柱床體積的超純水將乙醇沖洗干凈，用平衡緩沖液流洗5-10個柱床體積平衡柱子。
3、將樣品上柱，上樣流速60 cm/h。
4、平衡緩沖液再洗5-10個柱床體積，直至基線平穩(wěn)。
5、洗脫緩沖液洗脫，收集洗脫峰，用中和緩沖液將洗脫收集樣品中和到中性。
6、立即用5-10個柱床體積平衡緩沖液平衡柱子到中性。
7、再生緩沖液流洗3-5個柱床體積。先后用純水、20%乙醇分別流洗3-5個柱床體積。柱子置于2～8℃保存。
注意：操作中如果沒有實時的蛋白監(jiān)測系統(tǒng)，收集洗脫峰時可以分階段收集到多個管中，zuì后根據(jù)測定結(jié)果重新調(diào)整收集方式。
8、本產(chǎn)品使用10次以上后先用20%乙醇洗5個柱床體積，再用70%乙醇洗脫5-10個柱床體積，再用20%乙醇流洗3-5個柱床體積。柱子置于2～8℃保存。
儲存條件：2～8℃，避免冷凍
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王欣(女士) （來電時請說是從給覽網(wǎng)看到我的)
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