特別提示:包括銅鹽染色液(紅氨酸法)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:銅鹽染色液(紅氨酸法)
產(chǎn)品貨號:GL0912
產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml
用途:
銅和同相關(guān)蛋白染色
注意事項(xiàng):
固定劑采用中性福爾馬林,染色zuì好在恒溫水浴中進(jìn)行。
儲存條件:室溫,避光,6個(gè)月
根據(jù)您的關(guān)注的
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名稱:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針
貨號:YT175
規(guī)格:20μl
本探針是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針,可以用于活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性熒光染色。本探針為采用Molecular Probes公司的BODIPY TR進(jìn)行了熒光標(biāo)記的glibenclamide,分子量為915.23。
Glibenclamide即glyburide,中文名為格列苯脲,是一種2型糖尿病治療藥物,可以結(jié)合主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的sulphonylurea受體。因此熒光標(biāo)記的glibenclamide就可以用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性的熒光探針。
本探針對于細(xì)胞的毒性低。而傳統(tǒng)的DiOC6(3)對ER染色的同時(shí)也對細(xì)胞有一定的毒性。本探針呈紅色熒光,檢測時(shí)的zuì大激發(fā)波長為587nm,zuì大發(fā)射波長為615nm。
本探針按照后附的使用說明染色后,用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留。本品提供了探針稀釋液,使本探針的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋,可以配制20ml探針工作液;按照1:3000的比例稀釋,可以配制60ml探針工作液。
注意事項(xiàng):
1. 探針在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。對于微量的液體,每次使用前先離心數(shù)秒鐘,使液體充分沉降到管底。
2. 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
儲存條件:-20℃避光,有效期6個(gè)月。
名稱:溶酶體染色試劑盒(綠色熒光)-L02
貨號:HR8362
規(guī)格:125T|250T
名稱:細(xì)胞骨架染色試劑盒-C12
貨號:HR8578
規(guī)格:500T
細(xì)胞骨架(cytoskeleton)是真核細(xì)胞中由蛋白質(zhì)聚合而成的三維的纖維狀網(wǎng)架體系。細(xì)胞骨架包括微絲、微管和中間纖維。細(xì)胞骨架在維持細(xì)胞形態(tài),承受外力、保持細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的有序性方面起重要作用。細(xì)胞骨架肌動蛋白是球形的、大約42kd的蛋白,在幾乎所有的真核細(xì)胞都存在。這是一個(gè)非常保守的蛋白,在各物種差異不超過20%。肌動蛋白是兩種細(xì)胞內(nèi)絲狀結(jié)構(gòu)的構(gòu)成單體:微絲(三種主要的細(xì)胞骨架成分之一),以及細(xì)肌絲(是肌肉細(xì)胞收縮復(fù)合物的一部分)。肌動蛋白參與很多重要的細(xì)胞功能,包括肌肉收縮,細(xì)胞移動,細(xì)胞分裂和胞質(zhì)分裂、小泡和細(xì)胞器的運(yùn)動、細(xì)胞信號,以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形態(tài)的保持和建立。
顯示細(xì)胞骨架的常用方法有兩種:骨架蛋白染色法和免疫熒光染色法。骨架蛋白染色法具有簡單易行的特點(diǎn),但不能區(qū)分骨架蛋白的組成,有些類型的纖維太細(xì),在光學(xué)顯微鏡下無法分辨,常用于骨架形態(tài)及完整性研究;免疫熒光染色法可特異顯示骨架蛋白,是用一種微絲解聚抑制劑,它與肌動蛋白纖絲有強(qiáng)親和作用,使肌動蛋白纖絲穩(wěn)定,抑制解聚,且只與F-actin 結(jié)合.因此,利用熒光標(biāo)記可以清晰顯示細(xì)胞中微絲的形態(tài),利用熒光顯微鏡對熒光標(biāo)記的細(xì)胞骨架進(jìn)行觀察,可以得到清晰的實(shí)驗(yàn)結(jié)果.具有更普遍的應(yīng)用意義。
本試劑盒采用絲狀肌動蛋白F-actin熒光染色法染色細(xì)胞骨架,可以用于各種植物、動物的細(xì)胞骨架染色。需要常規(guī)骨架蛋白染色試劑盒,可以選擇我公司貨號HR8337的產(chǎn)品。
本試劑盒采用熒光探針C12標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽標(biāo)記骨架蛋白F-actin。
C12 為紅色熒光探針,我公司也為客戶提供綠色和藍(lán)色熒光的C11-Phalloidin和C13-Phalloidin標(biāo)記試劑盒??梢詽M足您完整的F-Actin微絲蛋白熒光染色方案,為您提供大的選擇空間和便利。
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)的環(huán)狀七肽毒素,以高親和力(Kd= 20 nM)選擇性結(jié)合于絲狀肌動蛋白F-actin,而不會與單體肌動蛋白G-actin 結(jié)合,通常用來標(biāo)記組織切片,細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞體系中的F-actin,從而對F-actin 進(jìn)行定性和定量分析。另外,鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維,無論是動植物來源的肌肉細(xì)胞或非肌肉細(xì)胞,按照每一個(gè)肌動蛋白亞基約與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的計(jì)量比結(jié)合。且非特異性結(jié)合幾乎可忽略,染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識度非常明顯。因此,鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動蛋白(Actin)抗體進(jìn)行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小,直徑約12-15?,分子量<2000 Daltons,未標(biāo)記肌動蛋白(Actin)的許多生理特性都得以維持,比如,同肌動蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng);鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì);以及甘油抽提的肌纖維標(biāo)記后仍可收縮等。鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)的結(jié)合阻止絲狀肌動蛋白(微絲)的解離,穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu),從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度(CC)降至<1μg/mL,因此,可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外,鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP 水解活性。
用熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色可以清晰地顯示細(xì)胞中微絲的分布。將鬼筆環(huán)肽注射到細(xì)胞中同樣能阻止細(xì)胞運(yùn)動,可見微絲的功能依賴于肌動蛋白的組裝和去組裝的動態(tài)平衡。鬼筆環(huán)肽這種性質(zhì)使得它們成為一種探索F-Actin分布的的良好工具,可以通過用帶有各種熒光探針的鬼筆環(huán)肽結(jié)合Actin 絲狀物在熒光顯微鏡下觀察來實(shí)現(xiàn)。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已經(jīng)被證明在活體或固定細(xì)胞內(nèi)定位Actin 絲狀物和在體外觀察actin 絲狀物的實(shí)驗(yàn)中起重要作用。
C12-Phalloidin染色反應(yīng)特異性強(qiáng),對比性高,具有比Actin抗體更好的染色效果,適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外,經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin 仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。且本品的結(jié)合沒有物種差異性,適用性廣泛。
C12-Phalloidin可以廣泛用于固定、通透性細(xì)胞,但也可以進(jìn)入活細(xì)胞中。
儲存條件:染料-20℃避光保存;稀釋液2-8℃保存。
有效期:六個(gè)月。
試劑盒以外自備試劑和儀器:
● 固定液4%多聚甲醛 ● PBS ● 純水
● 透化液0.05-0.1% Triton X-100(溶于PBS)● 100 nM DAPI溶液
● 載玻片和蓋玻片● 蓋玻片周圍密封液(如透明指甲油)● 激光共聚焦顯微鏡
注意事項(xiàng):
1.使用前請仔細(xì)閱讀說明書。
2.標(biāo)本應(yīng)新鮮,且未受其他化學(xué)物品污染。
3.應(yīng)根據(jù)組織、細(xì)胞類型不同調(diào)整通透時(shí)間。
4.動物細(xì)胞樣本細(xì)胞通透劑處理的時(shí)間很關(guān)鍵,如果處理時(shí)間太短,會造成很深的背景顏色,干擾細(xì)胞骨架的觀察;如果處理時(shí)間太長,會破壞骨架蛋白使骨架纖維斷裂,造成細(xì)胞空洞。通透時(shí)間應(yīng)控制在10-35分鐘。需要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的染色結(jié)果確定zuì佳通透時(shí)間。一般預(yù)實(shí)驗(yàn)起始通透時(shí)間植物樣本為10分鐘,動物細(xì)胞樣本5分鐘。
5.染色液染色時(shí)間根據(jù)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以進(jìn)行調(diào)整,顏色過淺可延長染色時(shí)間,顏色過深可縮短染色時(shí)間。
6.洗片時(shí)動作要輕柔,避免將細(xì)胞從玻片上洗掉。
7.染色后用水充分洗滌,自然晾干即可,不能用常規(guī)的酒精梯度脫水方法。
使用方法:
不同樣本的操作方法稍有差異,請根據(jù)具體樣本操作。下面以細(xì)胞爬片/涂片樣本的染色為例,滴加相應(yīng)的試劑到玻片上,加樣量以覆蓋樣本即可。如果是植物切片等,也可以在離心管、試管等里面進(jìn)行洗滌、通透、染色等操作,zuì后置載玻片上觀察即可。
1.染色工作液配制:
將染料稀釋液(10×)用純水10倍稀釋成1×染料稀釋液備用。根據(jù)樣本數(shù)量,用1×染料稀釋液將C12-Phalloidin熒光染料100-200倍稀釋,配制成染色工作液。
【注】: 建議收到產(chǎn)品后,根據(jù)單次使用量,對母液進(jìn)行小量分裝,-20℃避光凍存,一年穩(wěn)定。
開始實(shí)驗(yàn)前,使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。工作濃度為根據(jù)不同細(xì)胞的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的zuì佳工作濃度。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
2.將制作好的細(xì)胞爬片/細(xì)胞涂片用37℃預(yù)熱的1×PBS(pH 7.4)清洗2次。
3.細(xì)胞固定:滴加溶于PBS的4%甲醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,室溫固定5分鐘,立即用PBS 洗滌3次。
【注】: 避免固定劑中含有甲醇成分,因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^程中可能破壞肌動蛋白。
樣本多時(shí)可以用容器裝好PBS分別浸泡洗滌3次,樣本較少時(shí)也可以加500μl PBS 到玻片上進(jìn)行洗滌。
此步驟為動物細(xì)胞樣本的步驟,植物切片類不需要做此步驟,第2 步洗滌完直接進(jìn)行第4步通透即可。
4.室溫條件下,透化細(xì)胞:滴加0.05-0.1% Triton X-100/PBS溶液透化處理樣本,處理3-5分鐘。
【注】:經(jīng)Triton 破膜過度后,C12-Phalloidin可能對細(xì)胞核有非特異性染色,注意通透時(shí)間。
該步驟可以省略,因?yàn)镃12-Phalloidin分子量比較小,多聚甲醛固定后細(xì)胞膜產(chǎn)生的部分孔洞可以讓C12-Phalloidin 進(jìn)入細(xì)胞。
5.室溫條件下,用PBS 洗細(xì)胞3次,自然晾干。
6.室溫條件下,染色:用適量細(xì)胞骨架染色液工作液,覆蓋住玻片上的細(xì)胞,室溫避光孵育40分鐘-更長時(shí)間,zuì長可以過夜染色,一般40分鐘-1小時(shí)即可。
【注】:可以在染色工作液內(nèi)加入終濃度為1% BSA,能起到降低背景的作用;或者在染色前用含1% BSA的PBS 液室溫封閉細(xì)胞20-30分鐘。
孵育過程中為了避免溶液揮發(fā),可將玻片轉(zhuǎn)移到一個(gè)密封的容器內(nèi)。
7.用PBS 洗細(xì)胞3次,每次5分鐘。自然晾干。
8.使用適量濃度為100 nM的DAPI溶液對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染,約30秒即可。
9.用PBS洗細(xì)胞。
10.用激光共聚焦顯微鏡觀察。C12-Phalloidin激發(fā)/發(fā)射波長540-545/570-595nm和DAPI激發(fā)/發(fā)射波長359-364/454-461nm。
【注】:或封片后觀察。標(biāo)本玻片可置于4℃避光保存,通常6個(gè)月內(nèi)可繼續(xù)做染色分析。
結(jié)果:
細(xì)胞骨架纖維呈紅色。細(xì)胞核呈藍(lán)色。
細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)表面分布許多排列不規(guī)則的纖維束,走向清晰。
如果見到部分細(xì)胞骨架纖維并非呈纖維狀,而是呈串珠狀或顆粒狀,可以進(jìn)一步優(yōu)化通透、染色時(shí)間、染液濃度等條件。
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