特別提示:包括單線態(tài)氧檢測(cè)試劑盒-022在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:?jiǎn)尉€態(tài)氧檢測(cè)試劑盒-022
產(chǎn)品貨號(hào):HR8787
產(chǎn)品規(guī)格:100T|200T
活性氧(Reactive oxygen species,ROS) 包括過(guò)氧化氫(H2O2,Hydrogen peroxide)、羥基自由基(?OH,Hydroxyl radical)、單線態(tài)氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧陰離子(?O2-,Superoxide anion)、過(guò)氧化自由基(ROO? ,Peroxyl radical)、過(guò)氧羥自由基(HOO? ,hydroperoxyl)及其下游產(chǎn)物過(guò)氧化物過(guò)氧亞硝基陰離子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羥化物等,參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過(guò)程。活性氧(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生主要是氧化磷酸化的結(jié)果,在呼吸鏈中,在某些位點(diǎn)會(huì)有“泄露”的電子直接和氧氣或和其他電子受體反應(yīng),在酶或非酶作用下引發(fā)一系列反應(yīng)生成不同種類的活性氧:“泄露”的電子zuì初和氧氣反應(yīng)生成超氧陰離子自由基(O2·-)。超氧陰離子遇水生成H2O2,同時(shí)過(guò)氧化氫也可由氧氣在單胺氧化酶(mo
noamine oxidase,MAO)的作用下生成,生成的過(guò)氧化氫在髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的催化下與Cl-反應(yīng)可生成ClO-,在鐵或銅離子的催化下發(fā)生Fenton反應(yīng)生成OH·,超氧陰離子遇氮氧化物反應(yīng)生成ONOO-。這些生成的高氧化活性的物質(zhì)統(tǒng)稱為活性氧。
單線態(tài)氧檢測(cè)試劑盒是利用單線態(tài)氧特異性熒光探針單線態(tài)氧探針O22檢測(cè)單線態(tài)氧的試劑盒。單線態(tài)氧探針O22是合成的苯蒽類熒光探針,可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后,與細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧反應(yīng),被氧化生成綠色熒光物質(zhì),綠色熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧水平成正比,檢測(cè)綠色熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧的變化情況。
在激發(fā)波長(zhǎng)488 nm,發(fā)射波長(zhǎng)526 nm附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)綠色熒光,從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)單線態(tài)氧水平。
我公司可以提供O21細(xì)胞膜不透性的單線態(tài)氧熒光探針,其不能穿過(guò)細(xì)胞膜,需要借助破膜劑進(jìn)入細(xì)胞后與細(xì)胞內(nèi)的單線態(tài)氧反應(yīng)。O21可以用于液體的單線態(tài)氧檢測(cè)(相關(guān)產(chǎn)品:HR8788)。
儲(chǔ)存條件:-20℃保存。
【注】:
● O22 探針在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
有效期:一年。
※ ※ ※ 使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書 ※ ※ ※
使用限制:本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
產(chǎn)品更新:我公司會(huì)更新或升級(jí)產(chǎn)品,以優(yōu)化和增強(qiáng)其使用性能,產(chǎn)品說(shuō)明書會(huì)進(jìn)行相應(yīng)的版本更新。使用產(chǎn)品時(shí),請(qǐng)參照隨產(chǎn)品附帶的說(shuō)明書,不要參照網(wǎng)上下載的說(shuō)明書,可能是不同的版本。需要zuì新電子版說(shuō)明書時(shí)可以在收到產(chǎn)品后發(fā)郵件索取。
使用安全:使用時(shí)需要合適的實(shí)驗(yàn)室外套,一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛,應(yīng)立即用水沖洗。
注意事項(xiàng):
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
● 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
● zuì好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
產(chǎn)品特點(diǎn):
● 使用方便:可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè);
● 背景低,靈敏度高;
●線性范圍寬,使用方便。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材:
儀器:
● 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀,激發(fā)波長(zhǎng)500 ± 10 nm,發(fā)射波長(zhǎng)530 ± 10 nm,或者按照FITC熒光檢測(cè)條件檢測(cè)。
● 離心機(jī) ● 移液器 ● 冰箱 ● 冰盒
試劑:
● PBS緩沖液(pH7.4,實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液)
●或者HBSS(With:Calcium Magnesium Glucose; Without:Phenol Red。)
耗材:
● 離心管 ● 吸頭
使用方法:
使用注意事項(xiàng):
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。
●熒光探針標(biāo)記后,一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針,否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。
● 探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后,可以進(jìn)行激發(fā)波長(zhǎng)的掃描和發(fā)射波長(zhǎng)的掃描,以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。
● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間,以減少各種可能的誤差。
● 單線態(tài)氧O22在光照和空氣中易被氧化,注意避光密封保存。
● O22染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用,并且在當(dāng)天用完。
● O22對(duì)濕度非常敏感,若是O22溶液每次取完需要量后,必須緊緊密封蓋子。建議根據(jù)單次用量,分裝密封保存。不可使用含水的吸頭。
●對(duì)不同的細(xì)胞和組織,應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度,以觀察單線態(tài)氧的變化,很多細(xì)胞內(nèi)的單線態(tài)氧水平較低,需要根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
● 單線態(tài)氧O22探針可以根據(jù)需要的用量分裝后凍存,避免反復(fù)凍融。
● 單線態(tài)氧O22不可以一次性全部稀釋后長(zhǎng)期保存不用,稀釋后穩(wěn)定性變差,有效期縮短。
單線態(tài)氧探針O22配制:
根據(jù)樣本數(shù)量計(jì)算需要的用量,用探針稀釋液5倍稀釋單線態(tài)氧O22探針后充分混勻,避光保存?zhèn)溆?。稀釋后的單線態(tài)氧O22熒光探針zuì好在一個(gè)月內(nèi)用完,盡量避免反復(fù)凍融。
【注】:
● 可以不用試劑盒的稀釋液,直接用HBSS或不含血清的培養(yǎng)基稀釋。
單線態(tài)氧O22探針標(biāo)記:
1.單線態(tài)氧O22溶液可在新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基、HBSS緩沖鹽溶液或組織灌流液中稀釋到所需濃度,終濃度按試劑盒的母液的100-200倍稀釋,以此染色液更換細(xì)胞培養(yǎng)液或灌流液;也可直接向無(wú)血清細(xì)胞孵育液體或灌流液中加入單線態(tài)氧O22探針溶液至所需濃度。
2.依據(jù)細(xì)胞單線態(tài)氧含量的不同,單線態(tài)氧O22探針終濃度可選擇在100-200倍稀釋的范圍,孵育時(shí)間可選擇1-4小時(shí),在37℃或室溫進(jìn)行避光孵育。
3.孵育結(jié)束后,用PBS等新鮮溶液清洗細(xì)胞或組織。漂洗時(shí)間要短。
熒光顯微鏡觀察:
1.對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞或活組織,可直接在熒光顯微鏡下觀察;對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,取25-50μl細(xì)胞懸液滴到一張顯微載玻片上,再蓋上一張蓋玻片。
2.熒光顯微鏡下觀察。
流式細(xì)胞儀分析:
1.對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,用胰酶消化制備成單細(xì)胞懸液;對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,直接收集細(xì)胞。用0.5~1ml冰冷PBS重懸細(xì)胞(5~10萬(wàn))。
2.采用488nm波長(zhǎng)激發(fā),測(cè)定待測(cè)細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度。使用488nm激發(fā)波長(zhǎng),525nm發(fā)射波長(zhǎng),實(shí)時(shí)或逐時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)刺激前后熒光的強(qiáng)弱。探針O22的熒光光譜和FITC非常相似,可以用FITC的參數(shù)設(shè)置檢測(cè)探針O22產(chǎn)物。
根據(jù)您的關(guān)注的
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