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價格：電議
所在地：江蘇 南京市
型號：
更新時間：2018-12-08
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公司地址：南京市帕爾斯生物科技有限公司
李 (女士)
【 所用儀器、試劑】
具備的儀器：酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮 吹儀、刻度移液管
微量移液器：單道 20μl～200μl、單道100μl～1000μl、多道 30～300 μl
試 劑： 甲醇、正己烷、Na2HPO4·12H2O、NaOHNaH2PO4·2H2O、NaCl
【實驗前溶液配制】
配液1、20mM PBS緩沖液5.16gNa2HPO4*12H2O；0.87gNaH2PO4*2H2O;8.5gNaCl；加入蒸餾水至1000ml；用于樣品提取液
的配制。
配液2、樣品提取液的配制取1ml甲醇與9ml的20mMPBS緩沖液混勻。
配液3、 將2X濃縮復溶液用去離子水按1：1稀釋。(1份濃縮復溶掖+1份去離子水，用于抗體的稀釋和樣本提取后的復溶)。
配液4、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照 1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按 所需用量配制洗滌液。
【樣本前處理步驟】
u 樣本處理前須知
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具 進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
u 樣本處理：
（a）組織樣本前處理方法（不用過柱）
1、 稱取1±0.05g 均質后的樣本于離心管中，加入4ml樣品提取液，振蕩5min，室溫4000r/min 以上，離心10min；
2、 取1ml上清液收集于另一試管中;加入1ml 正己烷,振蕩1min，室溫4000r/min 以上，離心10min；
3、 取50 μl下層液體于另一容器中，加入200μl樣本稀釋液混合30s；
4、 取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數: 20 倍
（b）蜂蜜處理方法
1、 準確稱取1±0.05g 蜂蜜樣本于離心管中，加入4ml 樣品提 取液，強烈混合振蕩5min，室溫 4000r/min以上，離心10min；
2、 取出50μl 上清液于另一試管中，加入450μl樣本稀釋混合30s；
3、 取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數: 40 倍
（c）牛奶樣品處理方法
脫脂牛奶
1、取出50μl 脫脂牛奶與1950μl樣本稀釋液，混30s；
2、取50 μl 用于分析
脂肪奶
3、吸取1ml 牛奶樣本于離心管中；于15℃環境3000r/min，離心10min；（如果沒有冷凍離心機請預先冷卻后再離心)
4、取出50μl 牛奶于與1950μl樣本稀釋液，混合30s；
5、取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數: 40 倍
【 酶標免疫分析程序】
u 操作步驟：
1、 將所需試劑從冷藏環境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標準品/樣本50μl /孔，再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環境反應30min。
5、 取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、 每孔加入酶標記物100μl，蓋板膜蓋板后置25℃環境中反應30min。重復步驟5。
7、 顯色：每孔加入底物液A液50μl再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環境避光顯色15min。
8、 測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測在5min內讀完數
據），測定吸光度值（OD值）。
【結果判定】
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含土霉素的含量成負相關。
1、粗略判定：
用樣品的平均吸光度值與標準值比較即可得出樣本所含土霉素濃度范圍（ng/ml）。假設樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.892；0.1ppb為1.501；0.3ppb為1.175； 0.9ppb為0.751；2.7ppb為0.421；8.1ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍是2.7ppb-8.1ppb；樣品2的濃度范圍是0.3ppb-0.9ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中土霉素實際濃度。
2、定量分析：
所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以一個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以，即百分吸光度值。
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百分吸光度值（%）＝ |
B |
× |
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B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
以標準品百分吸光率為縱坐標，以土霉素標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中土霉素實際濃度。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。
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