大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒
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本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,具體說明書請聯(lián)系客服索取，本說明書是通用模板，有些數(shù)據(jù)不準確.
大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被樣本抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生里鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.酶標儀（450nm）

2.加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒

操作注意事項

1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

名稱 96孔配置 48孔配置 備注

微孔酶標板 12孔×8條 12孔×4條 無大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒

樣本稀釋液 6mL 3mL 無

檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液 6mL 3mL 無

封板膜 2張 2張 無

說明書 1份 1份 無

自封袋 1個 1個 無

注：標準品濃度都不相同，麻煩聯(lián)系客服索取相應(yīng)說明書

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于（參考說明書）

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6個月

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負責(zé)。

嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。

本品為科研試劑，只對單位實驗室學(xué)校等正規(guī)用途出售。

如需資料請向客服索取！

武漢純度生物科技有限公司，產(chǎn)主要生產(chǎn)銷售實驗室常用抗原抗體、試劑、Elisa試劑盒、免疫檢測試劑盒、金標試劑盒、金標檢測卡、動物血清、血漿、全血、抗血清、生物試劑、培養(yǎng)基、實驗室儀器耗材、化學(xué)試劑、生物制品、標準品、對照品、生化免疫制品、免疫親和柱、菌株、質(zhì)粒、室內(nèi)質(zhì)控品、細胞、細胞因子等產(chǎn)品研發(fā)與銷售。

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