SYA371 禽流感通用型和新城疫病毒
- 產(chǎn)品/服務：SYA371 禽流感通用型和新城疫病毒
- 型 號：SYA371
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1067
產(chǎn)品簡介
禽流感通用型和新城疫病毒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本品質量穩(wěn)定，價位合理，需要禽流感通用型和新城疫病毒等動物疫病PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示：包括禽流感通用型和新城疫病毒(AIV-M和NDV)通用型(二合一)熒光PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：禽流感通用型和新城疫病毒(AIV-M和NDV)通用型(二合一)熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA371
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒
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貨號：SYA344
規(guī)格：48次/盒|96次/盒
一、簡介：
新城疫病毒實時熒光qRT-PCR檢測試劑是按照美國農(nóng)業(yè)部(USDA)的檢測標準而制備的商業(yè)化檢測試劑盒。本試劑盒為中的探針報告基團為6-FAM，淬滅基團為MGB。
二、用途：
本試劑盒適用于檢測禽類喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各種組織樣品、尿囊液及細胞培養(yǎng)液等?？捎糜谛鲁且叨局旮腥镜妮o助診斷、監(jiān)測及流行病學調查，其檢測結果僅供參考。
三、試劑盒組成：(50T/Kit)
組份 數(shù)量 規(guī)格
熒光qRT-PCR反應液(NDV-qRT-PCR MIX) 1管 700μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對照(NTC) 1 管 50μL/管
陽性對照(NDV-PTC) 1 管 50μL/管
四、儲存條件及有效期
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個月。
五、熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。
六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照標準《新城疫診斷技術》(GB/T 16550-2008)和《新城疫檢疫技術規(guī)范》(SN/T 0764-2011)進行樣品的采集。
6.2 樣品RNA提取
可按常規(guī)方法提取，也可采用商品化試劑盒提取病毒RNA。
（1） 取滅菌的1.5 mL Eppendorf離心管，做好標識。
（2） 每管加入600 μL裂解液，分別加入被檢樣本200 μL，再加入200 μL氯fǎng，混勻器上振蕩混勻5 s，于4℃ 12000r 離心15 min。
（3） 取無RNA酶的1.5 mL Eppendorf離心管，加入-20℃預冷400μL異丙醇，吸取步驟(2)各管中的上清液轉移至相應的管中，避免吸出中間層，顛倒混勻。
（4） 于4℃ 12000 r離心15min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體；加入600μL 75％預冷乙醇，洗滌。
（5） 于4℃ 12000 r離心10min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體。室溫干燥5 min～10 min。
（6） 加入10μL無核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r離心5 s，冰上保存?zhèn)溆?。若需長期保存須放置-70℃冰箱。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應液(NDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 19 μL N×19 μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 20 μL N×20 μL
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入20μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(NDV -PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 real time RT-PCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
反轉錄(Reverse Trans
預變性 1循環(huán) 94℃ for 30 sec
PCR 擴增 40循環(huán) 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃ 延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。
八、結果分析：
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果?；€和閾值設定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應產(chǎn)生任何的擴增曲線。
（2） 陽性對照(NDV-PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
（3） 以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明NDV核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明NDV核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行NDV qRT-PCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明NDV核酸陽性；否則判為樣本陰性。
九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
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