一步法大提質粒DNA提取試劑盒由專業(yè)試劑供應商北京百奧萊博提供，用于生化實驗研究等領域，本品質量穩(wěn)定，價位合理，需要一步法大提質粒DNA提取試劑盒等DNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括一步法大提質粒DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：一步法大提質粒DNA提取試劑盒
英文名稱：One-step plasmid DNA large-scale extraction kit
產(chǎn)品貨號：BTN71101
產(chǎn)品規(guī)格：5次

本試劑盒是在我司一步法質粒DNA提取試劑盒2.0(BTN70903)基礎上開發(fā)的、能夠快速從100mL左右的E.coli培養(yǎng)液中取質粒DNA的產(chǎn)品。它只需要一種溶液即可以完成細菌裂解，并且裂解物可以直接上柱純化質粒DNA。它比經(jīng)典的堿變性質粒制備方法更加快捷和方便。

試劑盒特點：
1.快速，整個質粒DNA提取過程只需要不到30分鐘，比傳統(tǒng)的堿變性方法快捷。
2.超螺旋比例高，的非堿法一步式細菌裂解技術，避免了強堿對DNA的損害，得到的質粒DNA 切口更少。
3. DNA 純度高，幾乎沒有基因組DNA和RNA污染，OD260/280一般在1.7-1.9 之間。
4. DNA可以直接用于電泳、酶切、PCR、細菌轉化、分子克隆等實驗。
5. zuì大吸附量為600μg DNA，具體產(chǎn)率取決于質粒拷貝數(shù)。
6. 過程簡單，重復性和穩(wěn)定性好。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	100ml
大離心吸附柱	5套
通用預洗液	100ml
通用洗柱液	100ml
DNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸及保存(溶液A需要4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 用50mL離心管分數(shù)次收集10-100mL 新鮮的菌液，一般可以5000rpm離心10分鐘，去除上清即得細菌沉淀。
2. 往細菌沉淀中加入20mL溶液A，充分振蕩懸浮或吹打混勻。
 注意：充分重懸細胞沉淀(無塊狀物)對于獲得高的質粒產(chǎn)量十分重要。
3. 將裂解液全部轉移到大離心吸附柱中，放入到配套的收集管中。
4. 6000rpm離心5-10分鐘，棄穿透液。離心過濾柱將吸附溶液中的質粒DNA，而將基因組DNA和雜質在穿透液中。如果離心吸附柱中還有未離心下去的裂解液，可以適當延長離心時間直到離心吸附柱中沒有殘留液體。
5. 將10mL 通用預洗液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，棄穿透液。
6. 重復上步一次。
7. 將10mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，棄穿透液。
8. 重復上步一次。
9.室溫6000rpm 空甩5分鐘，棄穿透液。注意：此步很重要，不能跳過。
10. 將離心吸附柱放入一個自備的、干凈的50mL塑料離心管中，加1mL 通用洗脫液(洗脫液如加熱到50-65℃效果更佳)，室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，收集液即是質粒DNA溶液。
11. 重復上步1次以便洗脫更多的質粒DNA。
12. 合并所得質粒DNA，立即使用或-20℃儲存。

注意事項：
1．細菌培養(yǎng)時間一般為12-16小時，但接種量大時應減少時間。過度培養(yǎng)會降低質粒的質量甚至導致質粒DNA突變。
2．菌體過多會造成裂解液粘稠透，需要充分吹打，否則容易堵塞離心柱。
3．通用洗柱液洗滌離心柱后必須甩干一次，否則殘留通用洗柱液中的乙醇會干擾后續(xù)實驗。
4．質粒的具體產(chǎn)量跟細菌量、質?？截悢?shù)、質粒大小和操作規(guī)范程度密切相關。一般1.5mL 過夜培養(yǎng)菌體可收獲約10μg高拷貝質粒。
5．從生長旺盛的細菌中純化的質粒在電泳中表現(xiàn)為2-3 條帶有時甚至為4-6 條帶均屬正常，它們就是還未來得及分開的相套的質粒，易被誤判為基因組DNA。

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名稱：一步離心式石蠟清除劑
貨號：BTN70302
規(guī)格：100次
用石蠟包埋組織作為材料進行PCR的難題之一是如何有效去除石蠟，因為殘留的石蠟不但會影響DNA提取，還會干擾PCR擴增。常規(guī)的脫蠟方法一般需要1-2小時的時間，需要多次離心，每次離心都會造成樣品的丟失。本產(chǎn)品只需要一步離心，克服了常規(guī)方法的缺點。

產(chǎn)品特點：
1.快速簡單，只需要離心一次，免去了反復換液和離心，減少了樣品的丟失。
2. 脫蠟效果好，跟經(jīng)典的二甲苯/乙醇法相當。
3. 即開即用，客戶自己不需要準備額外的試劑。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
溶液A	100mL
溶液B	7.5ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 將1mL溶液A加入到1.5mL塑料離心管中。
2. 放入一片不超過25μm的石蠟包埋組織切片。
3.以zuì大速度振蕩10秒。
4. 加入75μL溶液B。
5. 振蕩10秒混合。
6. 7000 g離心2分鐘，小心吸棄上清。
7.真空抽干機抽干離心管中殘留的液體。此步驟約需要一小時。
8. 得到的石蠟包埋組織切片即可用于DNA提取。

名稱：非酶RNA清除劑1.0
貨號：BTN51203
規(guī)格：1.5mL
本品為非酶法質粒RNA和蛋白質污染的去除試劑，專用于從堿變性法純化的質粒中去除其中的大部分RNA污染和大部分蛋白質污染。

產(chǎn)品特點：
1.，能去除質粒粗提物中80%左右的RNA污染和60%的蛋白污染。而常用的RNase或LiCl處理只能去除RNA，不能去除蛋白質污染。
2.快速，整個過程只需要十余分鐘，不需要37℃保溫。
3. 經(jīng)過本產(chǎn)品處理過的樣品，由于沒有RNA和蛋白質的干擾，使用硅膠膜或其他吸附離心法吸附、回收質粒DNA的效率比沒處理過的樣品更高。
4. 價格不到RNase A的1/2，在質粒的大規(guī)模制備時成本更加明顯。
5. 制備臨床用(如基因治療)的質粒DNA時，可以減少后期在臨床報批、生產(chǎn)、質檢和使用中的很多麻煩(使用生物來源的RNase A和蛋白酶時，容易帶入對人體有害的內(nèi)毒素、LPS等污染物)。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法：

一、從堿變性澄清液中去除RNA和蛋白質
1. 將約1/5體積的RNA Scavenger加入到堿變性澄清液中(加溶液III后離心得到的上清液一般是450μl，所以需要加入50μl)。
2. 混勻后室溫放置10分鐘。
3.室溫8000g離心10分鐘。
4.轉移上清到一新的離心管中，后續(xù)處理跟經(jīng)典的方法一樣(即加入等體積的異丙醇或兩倍體積的乙醇,混勻后室溫離心10分鐘,棄上清液后用1mL 75%乙醇洗一次,短暫離心，去掉殘留液體,加入適量TE緩沖液溶解質粒待用)。

二、從質粒粗提液中去除RNA和蛋白質
1、將1/4體積的RNA Scavenger-1直接加入到已經(jīng)溶解在TE或其他溶解液的質粒DNA中。
2、混勻后室溫放置10分鐘。
3、室溫8000g離心10分鐘。
4、轉移上清到一新的離心管中，加入等體積的異丙醇或兩倍體積的乙醇。
5、混勻后室溫離心10分鐘。
6、棄上清液后用1mL 75%乙醇洗一次。
7、短暫離心，去掉殘留液體。
8、加入適量TE緩沖液溶解質粒待用。

使用效果：

圖注：用經(jīng)典的堿變性法從1.5mL E.coli過夜培養(yǎng)液中提取的pGEM-3質粒粗提物(加溶液ⅡI離心上清)經(jīng)過RNA Scavenger處理后(LA+RNA Scavenger)與未經(jīng)處理的樣品(AL)電泳比較。上樣量為1/5。

圖注：用經(jīng)典的堿變性法提取的pGEM-3質粒DNA溶于TE中后，經(jīng)過RNA Scavenger處理的(+)與未經(jīng)處理的(-)樣品進行電泳比較。處理過的樣品失去80%左右的RNA。

疑難解答：
Q：電泳檢測質粒DNA時也需要將其RNA污染去掉嗎?
A：是。否則RNA 將結合大部分的EB溶液,使質粒DNA的帶型減弱。
Q：RNA Scavenger-1跟RNA Scavenger-2 有何區(qū)別？
A：
1. RNA Scavenger-2處理過的樣品不再需要醇/鹽沉淀處理，而RNAScavenger-1處理的樣品還需要醇/鹽沉淀去除RNA Scavenger-1；
2. RNA Scavenger-2與柱式硅膠膜純化方法兼容，而RNA Scavenger-1 不兼容；
3. RNA Scavenger-2 不但可以用于去除質粒DNA的RNA污染，還可以用于去除基因DNA的RNA污染，而RNA Scavenger-1只能用于質粒DNA樣品。

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