一管式反轉(zhuǎn)錄試劑的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的基因結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)品，本制品用于科學(xué)研究，我公司的一管式反轉(zhuǎn)錄試劑品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括一管式反轉(zhuǎn)錄試劑在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：一管式反轉(zhuǎn)錄試劑
英文名稱：QuickQuant RT Super Mix
產(chǎn)品貨號：WH0100
產(chǎn)品規(guī)格：25次|100次

本制品為一管式預(yù)混Mix，使得cDNA的合成更加的方便快捷。4×QQ-RT Super Mix中含有RT-PCR中反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有試劑（QuickQuant RT Enzyme、RNase Inhibitor、Randomprimers、Oligo dT primer、dNTP Mixture、反應(yīng)Buffer），加入模板RNA和RNase-Free ddH2O即可進行反應(yīng)。本產(chǎn)品使用反轉(zhuǎn)錄酶QuickQuant RT Enzyme，可以在較短時間內(nèi)合成Real Time PCR所用的模板cDNA，特別適合cDNA合成以后的兩步法Real Time PCR檢測。

本制品合成的cDNA可以用于SYBR Green法和TaqMan探針法的定量PCR分析，可以根據(jù)實驗?zāi)康呐c我司定量PCR產(chǎn)品中的QuickFire qPCR PreMix（SYBR Green)和QuickFire qPCR PreMix （Probe)等定量試劑配合使用，進行更加快速和的基因表達分析。

產(chǎn)品特點：
·便捷：本產(chǎn)品為預(yù)混Mix形式，只需加入模板RNA和水便可以進行反應(yīng)。
·快速：只需42℃，18min即可完成cDNA鏈的合成。
·：反轉(zhuǎn)錄效率可達90%以上。
·普適：通讀GC含量高，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。

產(chǎn)品應(yīng)用：
· RT-PCR
· RT-qPCR
· cDNA文庫構(gòu)建

使用實例：

使用本制品反轉(zhuǎn)錄人類細胞系293T的總RNA。以得到的cDNA為模板，分別擴增不同長度目的基因，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。結(jié)果表明，本制品能夠反轉(zhuǎn)錄至少5 kb的片段。RNA使用量為1μg；電泳條件為6 V/cm,20 min。

使用本制品反轉(zhuǎn)錄人類細胞系293T的總RNA。按10的倍數(shù)稀釋得到的cDNA模板，使用染料法試劑對人類GAPDH基因進行qPCR檢測。結(jié)果顯示，本制品反轉(zhuǎn)錄能得到高質(zhì)量的cDNA，適用于染料法qPCR檢測目的基因的含量。RNA使用量為1μg，熒光定量所用試劑為SuperReal PreMix Plus（SYBR Green) （WH0103)，使用儀器為ABI 7500 Fast qPCR System。圖中分別展示擴增曲線（A)，標準曲線（B)和熔解曲線（C)。

使用本制品反轉(zhuǎn)錄人類細胞系293T的總RNA。按10的倍數(shù)稀釋得到的cDNA模板，使用探針法試劑對人類GAPDH基因進行qPCR檢測。結(jié)果顯示，本制品反轉(zhuǎn)錄能得到高質(zhì)量的cDNA，適用于探針法qPCR檢測目的片段的拷貝數(shù)。RNA使用量為1μg，熒光定量所用試劑為SuperReal PreMix（Probe)（WH0104)，使用儀器為ABI 7500 Fast qPCR System。圖中分別展示擴增曲線（A)和標準曲線（B)。

試劑盒組成：

組分	25次	100次
4× QQ-RT Super Mix	125μl	500μl
RNase-Free ddH2O	1ml	2×1ml

儲存條件：-20℃可保存12個月。

注意事項：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．本產(chǎn)品的適宜模板量范圍為50ng-2 μg的總RNA，如果總RNA量大于2 μg，請按比例擴大反應(yīng)體系。
2．在冰上進行操作，防止發(fā)生RNA降解。
3．不需分開變性和退火兩個步驟。但是對于二級結(jié)構(gòu)很復(fù)雜的RNA模板，推薦使用變性步驟，即在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉(zhuǎn)移到冰上，進行下一步操作。
4．反轉(zhuǎn)錄體系可以根據(jù)需要相應(yīng)擴大。

操作步驟：
使用QuickQuant cDNA鏈合成預(yù)混Mix合成鏈cDNA，50ng-2μg的總RNA可建立20 μl反應(yīng)體系。

1．將模板RNA在冰上解凍；4× QQ-RT Super Mix和RNase-Free ddH2O在室溫（15-25℃）解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。
  以下操作步驟請在冰上進行。為了保證反應(yīng)液配制的準確性，進行反應(yīng)體系配制時，應(yīng)先配制成Mix，然后再分裝到每個反應(yīng)管中。
2．按照下表所示配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系。

成分	使用量
4× QQ-RT Super Mix	5 μl
Total RNA	50ng-2μg
RNase-Free ddH2O	補足到20 μl

3．按照下表所示進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

反應(yīng)溫度	反應(yīng)時間	說明
42℃	15min	反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
95℃	3min	酶滅活過程

注意：
1．若后續(xù)實驗為實時熒光定量PCR，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過PCR體系終體積的1/10，例如50 μl的PCR反應(yīng)體系，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過5 μl。
2．將逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物置于冰上，再進行后續(xù)PCR反應(yīng)；如果需要長時間保存，請置于-20℃下保存。

RNA模板質(zhì)量控制：
逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成鏈cDNA，因此模板RNA的質(zhì)量直接影響逆轉(zhuǎn)錄結(jié)果。

1．模板的完整性：模板RNA的完整性對逆轉(zhuǎn)錄非常重要，若RNA模板中含有RNase酶將降解模板RNA，zuì后導(dǎo)致cDNA產(chǎn)物的量減少甚至無cDNA產(chǎn)物。
2．模板的純度：若RNA模板中含有蛋白、鹽離子、EDTA、乙醇、酚等雜質(zhì)，將影響逆轉(zhuǎn)錄酶的活性，zuì終影響逆轉(zhuǎn)錄結(jié)果。如若含有基因組DNA將影響后續(xù)實驗的準確性。
3．模板的加樣量：以上操作步驟適用于模板RNA量為50ng-2 μg，如果模板RNA的量大于2 μg，請按比例擴大反應(yīng)體系。

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