特別提示:包括高分辨率瓊脂糖(PCR級)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:高分辨率瓊脂糖(PCR級)
英文名稱:High Sieving Agarose
產(chǎn)品貨號:SY0256
產(chǎn)品規(guī)格:5g|25g|100g
瓊脂糖(Agarose)是純化的線性半乳聚糖親水膠體,提取自瓊脂或者含瓊脂的海藻,結(jié)構(gòu)上是一種線性聚合物,由β-D-吡喃半乳糖(1-4)連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基構(gòu)成。作為一種凝膠試劑,常用于通過凝膠電泳或者印跡法(如Northern或Southern)來進(jìn)行日常核酸分析,也適用于蛋白應(yīng)用,如輻射狀免疫擴(kuò)散(RID)實(shí)驗(yàn)。
本品為PCR級高分辨率瓊脂糖,對PCR產(chǎn)物、小片段DNA具有較高的分辨率,適宜分離20bp-800bp的DNA片段,其分離效果可與聚丙烯酰胺相媲美。此外,還具有如下特點(diǎn):
1)易溶解,膠液更清澈,可以配制高達(dá)5%的凝膠;
2)很低的背景;
3)品質(zhì)穩(wěn)定等。
瓊脂糖的基本參數(shù),包括:
1) 硫酸鹽含量(sulfate content)——純度指標(biāo),因?yàn)榱蛩岣谴嬖诃傊莾?nèi)的主要離子基團(tuán);
2) 凝膠強(qiáng)度(gel strength)——施加于凝膠使之?dāng)嗔训耐饬Γ?br />
3) 膠凝點(diǎn)(Gel point)——水溶性瓊脂糖溶液冷卻后形成凝膠時(shí)的溫度。液體向凝膠轉(zhuǎn)化的過程中,瓊脂糖溶液具有滯后性,因此,膠凝點(diǎn)不等同于膠熔點(diǎn)。
4) 電滲(EEO)——液體穿透凝膠的一種電動運(yùn)動。瓊脂糖凝膠內(nèi)的陰離子基團(tuán)吸附在基質(zhì)上不會發(fā)生遷移,但是解離的陽離子就會朝負(fù)遷移,從而產(chǎn)生電滲。由于生物聚合物的電泳遷移通常是朝負(fù)運(yùn)動,則EEO產(chǎn)生的內(nèi)部對流會干擾分離效率。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS:
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39346-81-1
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外觀(Appearance)
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白色粉末
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凝膠強(qiáng)度(Gel Strength)
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≥750g/cm2(1.5% gel)
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凝膠溫度(Gel Point)
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≤33℃(1.5% gel)
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融膠溫度(Melting Point)
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≤70℃(1.5% gel)
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電滲值(EEO, -mr)
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≤0.10
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外觀(Appearance)
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無色清澈膠液
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硫酸鹽(Sulfate, %)
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≤0.10%
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水分:
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≤10%
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灰分(Ash Content)
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≤0.5%
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DNA酶(DNase)
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Not detected
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RNA酶(RNase)
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Not detected
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蛋白酶(Protease)
|
Not detected
|
核酸內(nèi)切酶(Endonuclease)
|
Not detected
|
使用方法
1)配制適量電泳及制膠用的緩沖液(根據(jù)電泳需要,配制合適濃度的電泳及制膠緩沖液),倒入合適三角瓶中?!咀⒁狻浚河糜陔娪镜木彌_液和用于制膠的緩沖液必須是相同的。
2)根據(jù)制膠量及凝膠濃度,加入準(zhǔn)確稱量的瓊脂糖粉(總液體量不宜超過三角錐瓶的50%容量)。
3)在微波爐中加熱溶解瓊脂糖,設(shè)置中火加熱至沸騰,保持膠液沸騰約 30s,戴上防熱手套,移開三角錐瓶,小心搖動三角錐瓶,重懸未溶解顆粒,再次用高火加熱1分鐘(或加熱直至瓊脂糖完全溶解)。請戴上防熱手套,小心搖動三角錐瓶,使瓊脂糖膠液充分均勻。
【注意】:必須保證瓊脂糖充分完全溶解,此時(shí)瓊脂糖膠液清澈,否則,會造成電泳圖像模糊不清。加熱時(shí)如膠液劇烈沸騰發(fā)泡,停止加熱。微波爐中加熱時(shí)間不宜過長。
4)使溶液冷卻至60℃左右,如需要可在此時(shí)加入溴化乙錠(EB)溶液使其終濃度為0.5μg/ml,并充分混勻。
【注意】:溴化乙錠是一種致癌物質(zhì)。使用含有溴化乙錠的溶液時(shí),請戴用手套。建議使用我司提供的EB替代品(YeaRed 核酸染料,Cat# 10202),使用時(shí)僅需用制膠緩沖液稀釋至1×工作液即可。
5)將瓊脂糖溶液倒入制膠模具中,在適當(dāng)位置處插上梳子。凝膠厚度一般在3-5mm之間。
6)在室溫下使膠凝固(大約30min-1h),然后放置于電泳槽中進(jìn)行電泳。
【注意】:凝膠不立即使用時(shí),請用保鮮膜將凝膠包好后在4℃下保存,一般可保存 2~5天。
瓊脂糖濃度與DNA分離范圍
線性DNA片段大小(bp)
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20-250
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50-500
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100-1200
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500-2000
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瓊脂糖濃度(%)
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5.0
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4.0
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3.0
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2.0
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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50μL
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30mL
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BTN80401
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50次
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YT417
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3M醋酸鈉溶液(pH5.2)
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100ml
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關(guān)注
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