PCNA細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，我公司的PCNA細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營(yíng)血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國(guó)內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長(zhǎng)期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。

特別提示：包括PCNA細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：PCNA細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)
英文名稱：PCNA cell proliferation Detection Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：KFS335
產(chǎn)品規(guī)格：20T

PCNA 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（細(xì)胞免疫熒光法/流式細(xì)胞儀檢測(cè)），PCNA是細(xì)胞DNA 多聚酶的“δ”輔助蛋白，是真核細(xì)胞DNA 合成時(shí)所必需的一種酸性核蛋白。PCNA 在細(xì)胞核內(nèi)合成，并儲(chǔ)存在核內(nèi)，細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)時(shí)，其含量很低，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期中，其表達(dá)明顯增加，故PCNA 的表達(dá)高低可反映細(xì)胞增殖的活躍程度。

操作方法
1. 在zuì適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶處理和收集細(xì)胞，離心，（注意1）保證每管細(xì)胞數(shù)在106 個(gè)。
4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀細(xì)胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細(xì)胞2 次。
7. 用100μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重懸細(xì)胞，加入1ul PCNA 抗體(1μg/106 cells)，室溫孵育1 小時(shí)。
8. 離心收集細(xì)胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 離心收集細(xì)胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細(xì)胞。
11. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，轉(zhuǎn)移至流式檢測(cè)管中重懸。
12. FACS 檢測(cè)或者儲(chǔ)存于4℃。

注意事項(xiàng)
1.所有的沉淀細(xì)胞步驟為2,000 rpm, 5 min。
2.可滲透化處理細(xì)胞后細(xì)胞濃度大約為106 ，樣品可以4°C 儲(chǔ)存于乙醇中到2 個(gè)星期。
3.流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)需要設(shè)立對(duì)照試驗(yàn)：
只用PI 染細(xì)胞
只用羊抗小鼠IgG-FITC 染細(xì)胞
未染色的細(xì)胞組

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名稱：Caspase-2活性檢測(cè)試劑盒(分光光度法)
貨號(hào)：SNM514
規(guī)格：100T|50T|20T

名稱：細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)
貨號(hào)：KFS213
規(guī)格：10T|20T|50T|100T
本試劑盒可應(yīng)用于細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位檢測(cè)。大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，其中線粒體跨膜電位（△?）的破壞，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中zuì早發(fā)生的事件之一，它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前，一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。

本試劑盒采用JC-10 (Enhanced JC-1)一種陽(yáng)離子脂質(zhì)熒光染料作為檢測(cè)線粒體跨膜電位指示劑。JC-100 可以選擇性地進(jìn)入線粒體，且由于膜電位的增加，其顏色會(huì)發(fā)生從綠色到橙色的可逆性改變。這種特性是由于JC-100 聚合物的可逆結(jié)構(gòu)，在膜化條件下，它的發(fā)射光由520nm(JC-100 單體發(fā)射光)轉(zhuǎn)移到570nm (J-聚合體發(fā)射光)。當(dāng)在490nm 處激發(fā)時(shí)，JC-100 發(fā)生從綠色到橙綠色的可逆改變。這兩種顏色都可以被流式細(xì)胞儀上裝好的一般濾光器檢測(cè)到，因此綠色發(fā)射光可以通過(guò)熒光通道1（FL1）進(jìn)行分析，橙綠色發(fā)射光可以通過(guò)熒光通道2（FL2）進(jìn)行分析。它除了有潛力用于流式細(xì)胞術(shù)，也可以用于熒光成像分析。

注意事項(xiàng)
1. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. JC-10 避光保存及使用。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)至匯合度80-90%，收集細(xì)胞量在1×106/Test。
4. 對(duì)PH 變化過(guò)于敏感的細(xì)胞建議用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗滌，或延長(zhǎng)觀測(cè)時(shí)間。
5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位變化受到多種因素的影響，因誘導(dǎo)劑、細(xì)胞株類型，作用時(shí)間的不同而熒光強(qiáng)度比例都有不同，因此沒(méi)有通用標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)償設(shè)門指南，因此每個(gè)試驗(yàn)需設(shè)陰性及陽(yáng)性對(duì)照組進(jìn)行熒光補(bǔ)償及設(shè)門。
6. 組織需先制備單細(xì)胞懸液或提取純化線粒體后方可進(jìn)行檢測(cè)，可選用我司細(xì)胞懸液制備試劑盒或線粒體提取試劑盒。

名稱：MTS細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：KFS322
規(guī)格：500T
此試劑盒是用于測(cè)定細(xì)胞增殖與毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無(wú)放射性的比色檢測(cè)法。該試劑盒單溶液試劑包含一種四唑化合物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,內(nèi)鹽；MTS] 和一個(gè)電子耦合試劑( 乙硫吩嗪，PES)。PES 的化學(xué)穩(wěn)定性已得到增強(qiáng)，這使它能與MTS 混合形成一個(gè)穩(wěn)定的溶液。

檢測(cè)時(shí)，只需將少量MTS 溶液直接加到檢測(cè)板孔德培養(yǎng)基中，孵育1-4 小時(shí)，然后酶標(biāo)儀讀取490nm的吸光度值就可，省掉了有機(jī)溶劑的溶解步驟，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)過(guò)程，實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它如MTT, XTT 高。

注意事項(xiàng)
1. 本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。
2. 如果待測(cè)溶液有還原性，測(cè)定不含細(xì)胞，但含有細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液在490 nm 處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入此細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的200μl 培養(yǎng)基和10μl 細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液進(jìn)行檢測(cè)。
3. 用酶標(biāo)儀檢測(cè)前請(qǐng)確保孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。
4. 為保證您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

操作方法1.96 孔板加入細(xì)胞100μL/孔（約1×104），置37℃ 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時(shí)。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃，含5% CO2 空氣及濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。4.向各孔中加入10μl 的MTS 細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液。5.37℃下孵育1～4 小時(shí)。
6. 酶標(biāo)儀在490nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度。

結(jié)果分析
1. 細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
2. 求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。

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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
YT120	細(xì)胞凋亡DNA斷裂片段提取試劑盒	50次
YT121	細(xì)胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒(柱式吸附)	50次
KFS201	Caspase 2熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)	20T|50T|100T
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KFS314	細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒	20T|50T
QN1298	Hoechst 33342染色液	1mL

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