北京百奧萊博供應(yīng)的血液/組織/細(xì)胞總RNA提取試劑用于科學(xué)研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多血液/組織/細(xì)胞總RNA提取試劑等RNA提取純化產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。

特別提示：包括血液/組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒（磁珠法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：血液/組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒（磁珠法)
英文名稱：Magnetic Blood/Tissue/Cell Total RNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：WH0124
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒采用具有獨(dú)特分離作用的磁珠和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，從各種組織、細(xì)胞、血液中分離純化高質(zhì)量總RNA。本產(chǎn)品可與Kingfi sher Flex96自動核酸提取儀契合，通過特制的磁棒吸附、轉(zhuǎn)移和釋放磁珠，從而實(shí)現(xiàn)磁珠和核酸的轉(zhuǎn)移，提高了自動化程度。整個實(shí)驗(yàn)過程安全、便捷，提取的總RNA純度高，沒有基因組、蛋白和其它雜質(zhì)的污染。如果需要高通量自動化提取，我公司可以提供整合方案。

使用本試劑盒純化的RNA適用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆等多種下游實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·本試劑盒即可滿足手工提取也可適用于多種高通量平臺批量提取。
·本試劑盒所得產(chǎn)物滿足下游各類檢測實(shí)驗(yàn)以及NGS分析。

試劑盒組成：

組分	規(guī)格
裂解液RL	30ml
去蛋白液RD	48ml
漂洗液RW	2×12ml
RNase-Free ddH2O	15ml
磁珠懸浮液W	2×1ml

儲存條件：室溫（15-25℃)干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。該試劑盒中磁珠懸浮液W初次使用后建議置于2-8℃保存12個月。加入β-巰基乙醇的裂解液RL 4℃可放置1個月。

自備試劑：β-巰基乙醇、異丙醇、無水乙醇

選配試劑：DNase I （目錄號：WH0051)；10×紅細(xì)胞裂解液H （目錄號：WH0229)；RNase-Free過濾柱CS （目錄號：WH9007)

注意事項(xiàng)：（請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。）
1．操作前在裂解液RL中加入β-巰基乙醇至終濃度1%，如1ml裂解液RL中加入10μl β-巰基乙醇。此裂解液zuì好現(xiàn)用現(xiàn)配，配好的裂解液RL 4℃可放置1個月，裂解液RL在儲存時可能會形成沉淀，如果有沉淀出現(xiàn)，請加熱溶解后使用。
2.次使用前應(yīng)在去蛋白液RD與漂洗液RW中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標(biāo)簽。

操作步驟：

一、組織/細(xì)胞總RNA提取
1．樣本處理
①組織樣本勻漿：
  注意：組織量不要超過20mg，否則可能導(dǎo)致RNA得率和質(zhì)量下降。對于富含DNA的樣本，如脾臟，建議使用5 mg。
  取新鮮或-80℃凍存的組織，液氮充分研磨成粉末狀，稱取5-20mg至裝有450 μl裂解液RL（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇)的1.5 ml離心管（或者取適量組織加入裂解液后，電動勻漿)，立即渦旋混勻，室溫靜置5min，12000rpm離心5min，小心吸取上清。
②細(xì)胞樣本處理：
  a.懸浮細(xì)胞的收集（收集細(xì)胞數(shù)量請不要超過1×10⁷)：估計(jì)細(xì)胞數(shù)量，300×g離心5min，將細(xì)胞收集到離心管中，仔細(xì)吸除所有培養(yǎng)基上清。
  b.胰蛋白酶處理法：確定細(xì)胞數(shù)量，吸除培養(yǎng)基，用PBS溶液洗滌細(xì)胞，吸除PBS溶液，向細(xì)胞中加入含有0.10-0.25%胰蛋白酶的PBS溶液處理細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞脫離容器壁時，加入含有血清的培養(yǎng)基失活胰蛋白酶，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至RNase-Free的離心管中，300×g離心5min，收集細(xì)胞沉淀，仔細(xì)吸除所有上清。
  注意：收集細(xì)胞時一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則會導(dǎo)致裂解不完全，影響RNA與磁珠的結(jié)合，造成RNA的產(chǎn)量降低。

裂解細(xì)胞

沉淀細(xì)胞數(shù)量	裂解液RL
＜5×106	450μl
5×106～1×107	600μl

2．取上述樣本勻漿液450 μl，加入400 μl異丙醇和40 μl磁珠懸浮液W，振蕩器混勻5min，使磁珠吸附RNA。
3．將離心管置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液體棄去。
4．將離心管從磁力架上取下，加入900 μl去蛋白液RD（使用前檢查是否加入無水乙醇），振蕩混勻2 min。
5．將離心管置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液體棄去，室溫晾干5min。
6．（可選)將離心管從磁力架上取下，進(jìn)行DNase I消化：5 μl DNase I，70 μl RDD緩沖液。將配好的工作液加入樣本管中，室溫放置15min，期間每5min顛倒混勻一次。
7．加入700 μl去蛋白液RD（使用前檢查是否加入無水乙醇），振蕩器混5min。
8．將離心管置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液體棄去。
9．將離心管從磁力架上取下，加入700 μl漂洗液RW（使用前檢查是否加入無水乙醇），振蕩器混勻2 min。
10．將離心管置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液體棄去。
11．重復(fù)步驟9和10一次。
12．短暫離心將殘余溶液收集至管底，將離心管置于磁力架上，吸出所有液體棄去，室溫晾干5min。
13．將離心管從磁力架上取下，加入50-100 μl RNase-Free ddH2O，60℃加熱洗脫5min，期間顛倒混勻4-5次以充分洗脫RNA （或置于可加熱的振蕩器上洗脫)。
14．將離心管放置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心將RNA溶液轉(zhuǎn)移至干凈的離心管，繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)或保存于-70℃~-80℃。

二、血液總RNA提取
本試劑盒僅適用于提取新鮮血液總RNA，不適用于凍存血。

1．紅細(xì)胞裂解液的稀釋：根據(jù)處理血液樣品的體積選取適當(dāng)體積的10×紅細(xì)胞裂解液H（例如待處理的血液樣品體積為200 μl，則取140 μl 10×紅細(xì)胞裂解液H），用RNase-FreeddH2O稀釋至1×紅細(xì)胞裂解液H。
2．向1倍體積新鮮全血中加5倍體積1×紅細(xì)胞裂解液H （需自備合適的干凈管子)。
  注意1：為獲得zuì佳的混勻效果，血液和1×紅細(xì)胞裂解液H的混合液體積不應(yīng)超過管子體積的3/4。如果血液中的白細(xì)胞含量較高，可按比例減小血液的使用體積，第7步中的裂解液RL的使用體積也要進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。
  注意2：此處新鮮全血僅指哺乳動物；禽類血由于紅細(xì)胞含核酸，因此不需要進(jìn)行此步驟，可以根據(jù)需求確定血液起始量直接進(jìn)行全血裂解（即步驟7）。
3．在冰上孵育10-15min，在孵育過程中渦旋振蕩混勻2次。
  注意：在孵育的過程中溶液將變成半透明狀態(tài)，表明紅細(xì)胞裂解。如果必要的話，孵育時間可延長至20 min。
4．4℃條件下2,100 rpm （~400×g)離心10 min，將上清完全去除。
  注意：離心后白細(xì)胞可能會形成小球，確保完全去除上清。痕量紅細(xì)胞的存在，會使白細(xì)胞小球呈現(xiàn)紅色，而該現(xiàn)象會在隨后的漂洗步驟中消失。
5．向白細(xì)胞沉淀中加入1×紅細(xì)胞裂解液H（加入1×紅細(xì)胞裂解液H的體積是第1步中全血用量的2倍），重懸細(xì)胞。
6．4℃，2,100 rpm （~400×g)離心10 min，將上清完全去除。
7．向白細(xì)胞沉淀中加入裂解液RL（使用前請加入β-巰基乙醇），具體加量按照下表進(jìn)行，渦旋或使用移液器混勻。
  注：如果血液不是健康人的全血，需要根據(jù)血液中白細(xì)胞的數(shù)量來確定所需裂解液RL的體積，此時細(xì)胞應(yīng)完全裂解，塊狀細(xì)胞沉淀消失。

健康人類全血	白細(xì)胞數(shù)量	裂解液RL
0.5ml	＜2×106	400μl
0.5ml～1.5ml	2×106～1×107	600μl

8．（可選)將溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱CS中（過濾柱CS放在收集管中)，12000rpm（~13400×g)離心2 min，棄去過濾柱CS，收集濾液。
  注意：如果存在凝血點(diǎn)或片，建議進(jìn)行此步驟，否則會影響后續(xù)核酸與磁珠的結(jié)合以及純化。
9．取上述濾液加入1倍體積的異丙醇（通常為400 μl或600 μl)和40 μl磁珠懸浮液W，振蕩器混勻5min，使磁珠吸附RNA。
10．將離心管置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液體棄去。
11．將離心管從磁力架上取下，加入900 μl去蛋白液RD（使用前檢查是否加入無水乙醇），振蕩混勻2 min。
12．將離心管置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液體棄去，室溫晾干5min。
13．（可選）將離心管從磁力架上取下，進(jìn)行DNase I消化：5 μl DNase I，70 μl RDD緩沖液。將配好的工作液加入樣本管中，室溫15min，期間每5min顛倒混勻一次。（或者使用振蕩器振蕩15min)。
14．加入700 μl去蛋白液RD（使用前檢查是否加入無水乙醇），振蕩器混勻5min。
15．將離心管置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液體棄去。
16．將離心管從磁力架上取下，加入700 μl漂洗液RW （使用前檢查是否加入無水乙醇），振蕩器混勻2 min。
17．將離心管置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心吸出液體棄去。
18．重復(fù)步驟16和17一次。
19．短暫離心將殘余溶液收集至管底，將離心管置于磁力架上，吸出所有液體棄去，室溫晾干5min。
20．將離心管從磁力架上取下，加入50-100 μl RNase-Free ddH2O，60℃加熱洗脫5min，期間顛倒混勻4～5次以充分洗脫RNA （或置于可加熱的振蕩器上洗脫)。
21．將離心管放置于磁力架上靜置3 min，磁珠完全吸附后，小心將RNA溶液轉(zhuǎn)移至干凈的離心管，繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)或保存于-70℃～-80℃。

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名稱：水樣病毒沉淀劑
貨號：BTN101118
規(guī)格：10次

名稱：石蠟包埋組織RNA提取試劑盒
貨號：BTN81102
規(guī)格：30次
石蠟包埋組織本是珍貴的分子生物學(xué)研究材料，但是由于它們的保存時間一般都比較長，很不容易從中提取到可以進(jìn)行PCR的RNA，存在的主要問題是RNA的降解和脫蠟過程中樣品的丟失。本產(chǎn)品是專門用于從甲醛和非甲醛固定的石蠟包埋組織中快提RNA的試劑

試劑盒特點(diǎn)：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和樣品RNA的丟失。
2.含一步離心式脫蠟試劑，不需要使用有毒的二甲苯，健康環(huán)保。
3. 能有效去除基因組DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反應(yīng)。
4. 即開即用，客戶自己不需要準(zhǔn)備額外的試劑。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	30mL
溶液B	3mL
溶液C	5mL
溶液D	15mL
微量核酸沉淀劑	30mL
RNase-free水	10mL
說明書	1份

儲存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存(溶液C需要-20℃放置)，有效期一年。

使用方法：
1. 將5片厚度為6-8μM的石蠟包埋組織切片轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管(zuì好使用螺旋蓋離心管)中并加入1mL溶液A，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
2. 加入75μL溶液B，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
3. 7000×g室溫離心2分鐘，溶液將形成兩個相，其中組織切片位于下相。
4.小心吸棄上層液體。
5. 將離心管放入真空離心機(jī)中抽干下層的液體，一般需要一小時。
6. 加入150μL溶液C，55℃保溫過夜。
7. 短暫離心，95℃保溫10分鐘。
8. 加入0.5mL溶液D，充分震蕩半分鐘。
9. 加入0.1mL自備lǜ仿，振蕩器上充分振蕩混均30秒。
10. 13000-5000×g室溫離心3～5分鐘。
11. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機(jī)相(藍(lán)色)和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險起見，可以留下100μL上清液不取。同時吸取上清時zuì好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見的DNA。
12.在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑，振蕩器上振蕩30秒混勻。
13. 13000-15000g室溫離心5分鐘，離心底的側(cè)面將形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以將離心時間延長到20或30分鐘。
14.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL自備的75%乙醇，振蕩混勻30秒。
16. 13000-15000g室溫離心1分鐘。
17.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
18. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50μL)。注意不要吸棄沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
19.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千萬不要用真空離心法使RNA沉淀過于干燥，否則RNA將變得十分難溶。樣品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的電泳檢測：
21. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
22. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN81220	昆蟲RNA柱式提取試劑盒	50次
BTN120503	藻類RNA柱式提取試劑盒	50次
BTN3091	液相RNase清除劑	1.5mL
BTN80403	RNAse-free水	1mL
BTN81027	TRIzol試劑伴侶	50次
BTN100935	超純水	250mL
WE0202	植物RNA提取試劑盒(含DNase I)	50次

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