魚類組織DNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，我公司的魚類組織DNA提取試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。 主營產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

特別提示：包括魚類組織DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：魚類組織DNA提取試劑盒
英文名稱：Fish tissue DNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：ALH181
產(chǎn)品規(guī)格：50次|100次

本試劑盒采用獨(dú)特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除， zuì后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。本試劑盒適用于快速提取各種魚類、蝦類、扇貝等組織基因組DNA。

試劑盒組份(100次)：
裂解液SL————————————20ml
結(jié)合液CB————————————20ml
抑制物去除液IR—————————50ml
漂洗液WB————————————25ml
洗脫緩沖液EB——————————15ml
蛋白酶K————————————2×20mg
吸附柱AC————————————100個(gè)
收集管(2ml)——————————100個(gè)

注意事項(xiàng)：
洗脫液EB 不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH 大于7.5， pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA 應(yīng)該保存在－20℃。DNA 如果需要長期保存，可以用TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mMEDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
提示：次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB 中加入量無水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
1. 切取不多于30mg 的組織材料，放入裝有180μl 組織裂解液SL 的1.5ml 離心管中，渦旋振蕩15 秒。
根據(jù)提取的組織不同，起始量也稍有不同，腮的細(xì)胞量較大，一般建議提取量不超過20mg。如果裂解困難，可先用液氮研磨。
2. 加入20μl 的蛋白酶K 溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。將裂解物放置在55℃水浴1-3 小時(shí)或者直到組織消化完全。
不同組織裂解時(shí)間不同，通常需0.5–2小時(shí)即可完成。扇貝組織0.5小時(shí)基本可裂解完全，蝦和魚類組織1小時(shí)。每小時(shí)振蕩混合樣品2-3次，每次振蕩混勻15秒。
可選做步驟: 如果RNA 殘留較多，需要去除RNA，可在完成步驟2 后加20μlRNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10 分鐘。
3. 加入200μl 結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鐘。
4. 冷卻后加100μl 異丙醇，充分顛倒或渦旋振蕩充分混勻，此時(shí)可能出現(xiàn)絮狀沉淀。
5. 將上一步混合物和可能的沉淀都加入一個(gè)吸附柱AC 中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm 離心60 秒，倒掉收集管中的廢液。
如果有不溶組織物可能堵住槍頭，可將槍頭在吸水紙上輕蹭去除不溶物；如果吸上來的混合物少則可以將槍頭和不溶物一起棄去，該做法是為了去除不溶物，以免堵塞離心柱。
上述步驟中立刻渦旋或者吹打充分混勻非常重要，混勻不充分嚴(yán)重降低產(chǎn)量，必要時(shí)如樣品粘稠不易混勻時(shí)可以渦旋振蕩15秒混勻。
6. 加入500μl 抑制物去除液IR，12000rpm 離心30 秒，棄廢液。
7. 加入700μl 漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
8. 加入500μl 漂洗液WB，12000rpm 離心30 秒，棄掉廢液。
9. 將吸附柱AC 放回空收集管中，13,000rpm 離心2 分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10. 取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl 洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置3-5 分鐘，12000rpm 離心1 分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2 分鐘，12000rpm 離心1 分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是zuì小體積不應(yīng)少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。
11. DNA可以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間存放，可以放置在－20℃。

儲(chǔ)存條件：室溫，有效期12個(gè)月。

本制品別名：蝦DNA提取試劑盒|扇貝DNA提取試劑盒|魚DNA提取試劑盒

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名稱：非凍型組織DNA保存液
貨號(hào)：BTN3660
規(guī)格：250mL
本品是我公司推出的在室溫條件下長期保存DNA樣品的保存液。它能迅速滲入細(xì)胞內(nèi)，通過抑制DNase的活性而長期保證DNA的完整性。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 保存時(shí)間長，可室溫保存動(dòng)植物組織長達(dá)兩年，保護(hù)DNA不被降解。
2. 安全可靠，本產(chǎn)品無害，從DNA保存液保存的樣品中提得的DNA可用于酶切和PCR等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
3. 使用簡單，直接把新鮮的動(dòng)植物樣品浸在DNA保存液中即可。
4.可廣泛用于各種動(dòng)植物標(biāo)本的野外采集。

儲(chǔ)存條件：室溫運(yùn)輸及保存，有效期兩年。

使用方法：

步：準(zhǔn)備工作
1.估計(jì)完全浸沒樣品所需要Tissue DNA保存液的體積。
注：1g 組織約需10mL Tissue DNA保存液。
2.標(biāo)記收集管并加入估計(jì)所需量的Tissue DNA保存液。

第二步：樣品的處理
1.以zuì快速度將樣品剪切成厚度小于0.5cm的碎塊。
注：鼠肝、腎和脾等小器官樣品和沒有蠟質(zhì)保護(hù)層的植物樣品可不需剪切而直接放入本產(chǎn)品中保存，有蠟質(zhì)保護(hù)層的植物樣品需要先將蠟表皮破壞。
2.將組織碎塊完全浸沒于收集管的Tissue DNA保存液中。

第三步：樣品的存放
將收集管存放于溫度適當(dāng)?shù)牡胤剑４鏈囟炔灰陀?℃。

第四步：樣品的使用
1.從存放處取出樣品，用消過毒的鑷子將組織碎塊從保護(hù)液中取出。
2.立即開始DNA提取。

名稱：柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))
貨號(hào)：BTN80803
規(guī)格：50次
線粒體DNA(mtDNA)是進(jìn)行分子進(jìn)化研究和母性遺傳研究的重要材料，但傳統(tǒng)的兩步式mtDNA提取方法是先溫和裂解細(xì)胞，分離線粒體，然后再從線粒體中提取mtDNA。此方法中的溫和裂解細(xì)胞的條件十分難以控制，需要針對(duì)不同組織材料單獨(dú)進(jìn)行優(yōu)化。本試劑盒克服了上述缺點(diǎn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。
4. 注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大，非常難提。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，短期可以在室溫放置；長期保存zuì好放4℃。

使用方法：

一：培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞，離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次，離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二：組織細(xì)胞預(yù)處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小zuì好)，轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中，用于mtDNA提取。注意：zuì好不要使用凍存的動(dòng)物組織，因?yàn)閮瞿^程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破，使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解，影響回收率。
三：血液預(yù)處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘，取白細(xì)胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次，得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。
四：mtDNA提取
5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的組織，不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀，用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用)，溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要?jiǎng)×艺袷帯?br /> 7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C，溫和混勻4-6次，可見白色沉淀物產(chǎn)生，然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000～15000g離心10分鐘，小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大，有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象，取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合，此步十分重要。
11.室溫12000～15000g離心1分鐘，棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液，室溫12000～15000g離心1分鐘，棄收集管中廢液。
 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要將蓋擰緊存放，否則乙醇會(huì)揮發(fā)。
13. 重復(fù)上步1次。
14.室溫12000～15000g離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中，加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液，室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫，但產(chǎn)量稍微有所降低。
16.室溫12000～15000g離心1分鐘，離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng)，如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中，往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%)，但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000～15000g離心1分鐘，離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮，可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機(jī)械斷裂，電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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