特別提示:包括7KD透析袋(φ16mm)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:7KD透析袋(φ16mm)
產(chǎn)品貨號:HR8150
產(chǎn)品規(guī)格:1卷,5M
壓平寬度:25mm
根據(jù)您的關(guān)注的
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名稱:SDS裂解液
貨號:YT039
規(guī)格:100ml
本品是一種比較強烈的細胞組織裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、ChIP(染色質(zhì)免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等。
SDS裂解液的主要成分為50mM Tris (pH8.1),1% SDS,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制劑??梢杂行б种频鞍捉到狻?br />
用SDS裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用百奧萊博的BCA蛋白濃度測定試劑盒(YT036/YT037)測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
儲存條件:-20℃,有效期一年。
名稱:Western抗體稀釋液
貨號:WE0295
規(guī)格:100ml
在蛋白印跡(Western Blot , WB)實驗中,一抗和二抗通常需要適當稀釋使用。本公司生產(chǎn)的WB抗體稀釋液可用于蛋白印跡時抗體的稀釋和配制,稀釋和配制的一抗或二抗可以在4℃保存和使用不少于1周,可以反復2-3次用于蛋白印跡,節(jié)約您寶貴的抗體。本產(chǎn)品僅用于WB實驗中的抗體和標記物的稀釋。
注意事項:
1、本產(chǎn)品屬蛋白制劑,室溫放置過久易導致蛋白的降解和活性喪失。
2、為了能使抗體可以反復多次使用,建議盡量在2~8℃進行一抗和蛋白膜的結(jié)合反應,以減緩一抗的衰減速度。
3、本產(chǎn)品含防腐劑,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作步驟:
1.臨用取出本產(chǎn)品,顛倒數(shù)次以混勻,取適量用于抗體稀釋。一抗和二抗的稀釋比例請參照廠家使用說明。
2.一次實驗結(jié)束后,可以回收抗體稀釋液,2~8℃保存,一周內(nèi)可用于下次的WB。
儲存條件:2~8℃
名稱:一步法快速WB試劑盒(兔源一抗)
貨號:WE0298
規(guī)格:50次
本試劑盒是百奧萊博zuì新研發(fā)的Western Blot檢測試劑盒,能夠在1小時左右得到高質(zhì)量的Western Blot結(jié)果,且操作簡便、檢測靈敏度高、背景低、不需再加入二抗、系統(tǒng)穩(wěn)定性強。常規(guī)的Western Blot間接法檢測過程(封閉、一抗結(jié)合和二抗結(jié)合)需要較長的時間,實驗流程復雜且需要多步條件優(yōu)化。膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到載體膜上后,使用試劑盒中的封閉液孵育5 min,再用抗體反應液處理后的一抗孵育載體膜,經(jīng)洗滌三次(每次5 min)后,即可進行發(fā)光或顯色檢測。本試劑盒針對目的蛋白一抗為兔來源的實驗系統(tǒng)使用。
組份
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50次
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Blocking
Buffer
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500ml
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Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)
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5×1ml
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Dilution Buffer
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500ml
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Wash Buffer(10×)
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500ml
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注意事項:
1、客戶需自己準備兔來源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封閉液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)抗體反應液(兔)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前請充分混勻。
3、漂洗液如在2~8℃保存時出現(xiàn)沉淀,請恢復到室溫,把沉淀溶解后正常使用,1×漂洗液可在室溫保存一個月。
4、建議轉(zhuǎn)膜完成后用麗春紅等試劑染色,并把膜上多余部分剪去以增加試劑的使用效率。
5、一抗和抗體反應液HRP(兔)需要通過預實驗來確定zuì佳的稀釋用量。
6、抗體反應液HRP(兔)、抗體稀釋液和抗體用量可根據(jù)膜的大小按比例放大或減少。
7、加入一抗的抗體稀釋液可以回收重復使用一次。特異性及親和力低的抗體不建議重復使用?;厥蘸罂贵w如在1-2天內(nèi)使用放置在2~8℃,長期保存請在-20℃凍存,避免多次反復凍融。
8、如果存在較高背景的情況,請調(diào)整抗體的用量,并增加洗膜次數(shù)。
9、試劑盒內(nèi)所有試劑請于2~8℃保存,避免凍融。
操作步驟:
本產(chǎn)品適用于轉(zhuǎn)膜完成后的封閉及抗體孵育步驟,以5cm×8cm 膜為例:
1、漂洗液準備:取10ml Wash Buffer(10×)用蒸餾水稀釋至100ml,即為1×Wash Buffer,待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封閉:轉(zhuǎn)膜完成后,將膜浸沒到10ml Blocking Buffer中,室溫封閉5分鐘。
3、漂洗:倒掉封閉液,加入8-10ml 1×Wash Buffer,于搖床上用較大速度漂洗1分鐘。
4、洗膜的同時可準備抗體孵育液:取Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)100μl到離心管中,加入兔源一抗3-10μg,槍頭吸打至充分混勻,室溫孵育5分鐘。加入至10ml Dilution Buffer中,充分混勻。
注意:
1)一抗的用量也可根據(jù)抗體的稀釋度來進行調(diào)整。以抗體的zuì終稀釋度1:1000為例,取100μl抗體反應液HRP(兔)到EP管中,加入10μl一抗,加入到10ml 抗體稀釋液中,充分混勻,室溫孵育5分鐘。
2)如果膜面積較小,可按比例減少抗體、反應液及稀釋液的用量。
5、完成步驟3后,倒掉漂洗液,將一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)及Dilution Buffer混合而成的抗體孵育液加到膜上(確保孵育液完全浸沒膜表面),在搖床上以60 rpm左右的速度室溫孵育40分鐘。
6、棄去(回收)抗體孵育液,用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次,每次3分鐘。
7、進行后續(xù)檢測。建議采用ECL或者DAB法進行檢測。
應用實例:
1.jpg)
實例一 抗原為293T細胞全裂解液
A:普通WB對照:beta-actin兔多抗 3.3ug 室溫孵育40min,洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1:10000稀釋,室溫40min,ECL(WE0308)曝光
2.jpg)
實例二 抗原為293T細胞全裂解液
C:普通WB對照:PAK1,Epitomics兔單抗1:1000 室溫孵育40min,洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1:10000稀釋,室溫40min,ECL(WE0308)曝光
D:一步法WB: Epitomics兔單抗1:1000 室溫孵育40min,ECL(WE0308)曝光。
常見問題及解決方法:
問題
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可能原因
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解決方案
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信號太弱或者
看不到條帶
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蛋白上樣量太少
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進行SDS-PAGE電泳時加大上樣量。
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蛋白轉(zhuǎn)膜效率太低
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優(yōu)化轉(zhuǎn)膜時間或者電流,確保轉(zhuǎn)膜時膜與膠之間沒有氣泡。
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一抗親和力較低
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增加膜在溶液中的孵育時間或者增加抗
體濃度可以增加信號
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一抗親和力較低
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對于低親和力抗體來說,減少洗膜時間可以增加信號。由每次10 分鐘,減少到每次5分鐘可以增加信號。
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背景偏高
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一抗使用過量
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減少一抗的使用量。
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一抗有非特異性結(jié)合或者
與封閉試劑有交叉反應
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使用和二抗來源一致的血清或者無IgG的BSA。
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洗膜時間太短
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增加洗滌的步驟可以進一步的降低背景。
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曝光顯影時間過長
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減少曝光時間。如果信號和背景都高,可以等待一段時間
,等背景信號減弱后,再進行曝光。
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容器或者試劑被污染
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每次洗滌的時候使用清潔的容器。帶手套,使用清潔的鑷子處理膜。
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儲存條件:2~8℃保存,避免冷凍
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關(guān)注
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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BTN100302
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包涵體蛋白溶解及復性套裝
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100次
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BTN131120
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8M鹽酸胍溶液
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250mL
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SNM433
|
WB二抗稀釋液
|
100ml
|
SNM443
|
考馬斯亮藍脫色液
|
250ml
|
SY0347
|
DTT 二硫蘇糖醇
|
10g|100g
|
SY0419
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DEAE弱陰離子純化預裝柱,1ML
|
1ml
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SY0436
|
人β-淀粉樣多肽 1-42
|
1mg
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