特別提示:包括蛋白酶抑制劑Cocktail, EDTA-free, 100×DMSO儲(chǔ)液在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:蛋白酶抑制劑Cocktail, EDTA-free, 100×DMSO儲(chǔ)液
英文名稱:Protease Cocktail, EDTA-free, 100×DMSO Stock Solution
產(chǎn)品貨號(hào):SY0324
產(chǎn)品規(guī)格:1ml|10×1ml
細(xì)胞裂解后的蛋白粗提物中含有大量的內(nèi)源性蛋白酶,這些酶可以降解細(xì)胞提取物中的蛋白。因此為了防止蛋白純化過程中目的蛋白不受蛋白酶的破壞,需要加入蛋白酶抑制劑對(duì)其進(jìn)行活性抑制。
本品是多種常見蛋白酶抑制劑的混合物,包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin A多種成分,廣譜抑制來源于動(dòng)植物、細(xì)菌、酵母等組織或細(xì)胞內(nèi)的多種蛋白酶,如絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、氨肽酶、酸性蛋白酶等。另外,本品不含EDTA(一種金屬蛋白酶抑制劑),特別適用于活性中心為金屬離子依賴的蛋白。兼容于后續(xù)的固定化金屬離子親和層析(Immobilized me
tal-chelate affinity chromatography, IMAC)、2-D 凝膠電泳以及天然凝膠電泳等蛋白分析實(shí)驗(yàn)。
本品為溶于DMSO的溶液,以100×儲(chǔ)存液的形式提供,可用于WB, Co-IP, Pull-down assay, IF, IHC,激酶研究等多種分析。
使用方法:使用前將本品取出回溫至室溫,樣品分析前按照1:100(v/v)的比例加入到樣品溶液中,混勻即可。
儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期一年。
注意事項(xiàng)
1)本品具有廣譜的蛋白酶抑制活性,但是不具有磷酸酶抑制劑活性。若進(jìn)行磷酸化蛋白的研究,可使用我司的磷酸酶抑制劑混合物(100×)(Cat#SY0311)。
2)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
根據(jù)您的關(guān)注的
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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SNM393
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β-巰基乙醇
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50ml
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SNM487
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胃蛋白酶
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1g
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SNM493
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防脫載玻片(經(jīng)多聚賴氨酸處理)
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50片
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SY0357
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4×Tris-HCl濃縮膠緩沖液,pH6.8
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250ml
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SY0362
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丙烯酰胺
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500g
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SY0399
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鏈霉親和素瓊脂糖純化樹脂
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5ml
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SY0407
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12ml重力層析空柱
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5×1套
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關(guān)注
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名稱:動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒
貨號(hào):BTN90707
規(guī)格:50次
本產(chǎn)品用于快速提取動(dòng)植物總蛋白,用于SDS-PAGE凝膠電泳和Western印跡分析以及蛋白活性測定等。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 提取過程十分簡便,勻漿離心即可,整個(gè)過程只需要十幾分鐘。
2. 采用獨(dú)特的溫和裂解成分,蛋白保持天然活性。
3.適用于各種動(dòng)植物組織材料,包括新鮮或冰凍的材料。
4. 得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D電泳、Western印跡分析以及蛋白活性測定等下游實(shí)驗(yàn)。
5.一次可以處理100mg左右的樣品,足夠進(jìn)行幾十次SDS-PAGE mini膠電泳檢測。
試劑盒組成:
成分
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規(guī)格
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溶液A
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50ml
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5×SDS-PAGE上樣液
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1ml
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說明書
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1份
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儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸,4℃保存,5×SDS-PAGE上樣液短期4℃保存,長期可放-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
使用前,zuì好請?jiān)谌芤篈中加入自備的1M DTT溶液50μL。
一:
勻漿法
注意:對(duì)致密的實(shí)體組織(如肌肉),zuì好用Polytron 式勻漿機(jī)勻漿處理。
1. 稱取動(dòng)物或植物組織樣品100mg,剪刀剪成黃豆大小,轉(zhuǎn)移到10-15mL的塑料離心管中。
2. 加入1ml溶液A,在冰上用Polytron 式勻漿機(jī)勻漿,直到?jīng)]有肉眼可見的組織塊。為了避免產(chǎn)熱,可以分多次勻漿,其間放冰上讓勻漿液冷卻。
3. 將勻漿液全部轉(zhuǎn)移到1.5mL的塑料離心管中。
4. 4℃ 12000 g離心10分鐘,組織殘?jiān)槠瑢⑿纬沙恋怼?br />
5. 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5mL塑料離心管中即得到蛋白溶液,可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要測定蛋白濃度,請使用BCA方法,不要使用Bradford方法(如果要使用,也需要把樣品稀釋10倍后再測定,否則溶液A中的成分會(huì)影響濃度側(cè)定)。如果要進(jìn)行SDS-PAGE電泳,可取部分到離心管中,加入5×SDS-PAGE上樣緩沖液(終濃度為1×),在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。
二:
直接研磨法
注意:可以使用玻璃和陶瓷的研缽,也可以使用與微量離心管式的研磨杵(BTN80603)
1. 稱取動(dòng)物或植物組織樣品100mg,剪刀剪成黃豆大小,轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的研缽或離心管中。
2. 加入1ml溶液A,用研磨杵研磨,直到?jīng)]有肉眼可見的組織塊。
3. 將勻漿液全部轉(zhuǎn)移到1.5mL的塑料離心管中。
4. 4℃ 12000g離心10分鐘,組織殘?jiān)槠瑢⑿纬沙恋怼?br />
5. 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5mL塑料離心管中即得到蛋白溶液,可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要測定蛋白濃度,請使用BCA方法,不要使用Bradford方法(如果要使用,也需要把樣品稀釋10倍后再測定,否則溶液A中的成分會(huì)影響濃度側(cè)定)。如果要進(jìn)行SDS-PAGE電泳,可取部分到離心管中,加入5×SDS-PAGE上樣緩沖液(終濃度為1×),在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。
三:
液氮研磨法
注意:zuì好使用玻璃和陶瓷的研缽
1. 取大約100mg動(dòng)物或植物組織樣品,轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的研缽中。
2. 加入少量液氮,用研磨杵研磨成粉。
3. 加入1ml溶液A溶解,然后將溶液全部轉(zhuǎn)移到1.5mL的塑料離心管中。
4. 4℃ 12000 g離心10分鐘,組織殘?jiān)槠瑢⑿纬沙恋怼?br />
5. 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5mL塑料離心管中即得到蛋白溶液,可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要測定蛋白濃度,請使用BCA方法,不要使用Bradford方法(如果要使用,也需要把樣品稀釋10倍后再測定,否則溶液A中的成分會(huì)影響濃度側(cè)定)。如果要進(jìn)行SDS-PAGE電泳,可取部分到離心管中,加入5× SDS-PAGE上樣緩沖液(終濃度為1×),在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。
注意事項(xiàng):
1.如果4℃ 12000g離心10分鐘后得到的上清液中還有可見的沉淀,可以將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中后再4℃ 12000g離心10分鐘,以去除可見的小碎片。
2.植物組織中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代謝產(chǎn)物,如果需要除去植物蛋白樣品中殘存的色素等雜質(zhì),可以在zuì后得到的上清液中加入5倍體積的冷丙酮或冷甲醇,混勻后-20℃放置1小時(shí)或過夜,然后4℃,12000rpm離心10min,棄上清后室溫風(fēng)干,然后將樣品溶于自備的后續(xù)實(shí)驗(yàn)緩沖液中即可。經(jīng)過此純化處理后,部分蛋白質(zhì)可能會(huì)發(fā)生變性,不能再用于活性檢測。
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