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北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術服務，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關系，擁有較好的企業(yè)信譽和品牌形象。 主營產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

特別提示：包括透析袋27mm，截留分子量50kd在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：透析袋27mm，截留分子量50kd
產(chǎn)品貨號：HR0394
產(chǎn)品規(guī)格：1卷，5M



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名稱：包涵體蛋白溶解及復性套裝
貨號：BTN100302
規(guī)格：100次
本產(chǎn)品用E.coli作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體，其中的重組蛋白質(zhì)只完成部分折疊，還沒形成zuì后的正確空間結構，所以沒有生物活性，要得到有活性的重組蛋白，還需要后續(xù)的溶解和復性(重折疊)處理。目前zuì常用的溶解包涵體的方法是用尿素，Sarkosyl，鹽酸胍等強變性劑，其缺點是包涵體中的重組蛋白質(zhì)被徹底變性，使后續(xù)的蛋白質(zhì)復性處理效率降低。本產(chǎn)品根據(jù)包涵體中的重組蛋白質(zhì)已經(jīng)完成了部分折疊這一實事設計。

產(chǎn)品特點：
1.一站式，提供包涵體洗滌、溶解和蛋白質(zhì)復性的所有試劑。
2. 采用溫和法溶解包涵體，釋放的包涵體蛋白質(zhì)不徹底變性，還能保持其部分折疊的結構，使后續(xù)的復性處理效率提高。
3. 所用復性液基于稀釋復性，經(jīng)過精心優(yōu)化，有利于大部分蛋白的復性。
4.還提供五種不同的添加劑，它們可以單獨加入復性液，也可以按一定比例進行自由組合，以適應不同的蛋白質(zhì)折疊需求。
5. 本試劑盒提供實惠的小規(guī)格，用于做預實驗用，用戶如果選擇到合適的溶液組合后，可以單獨購買其中的溶液以用于大量制備。
6. 本試劑盒足夠100次小規(guī)模(1mL規(guī)模)的蛋白質(zhì)復性實驗。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
包涵體洗滌液	250mL
包涵體溫和溶解液(10種各一套)	10×10ml
包涵體蛋白質(zhì)復性液	250ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

自備試劑：去離子水、BCA蛋白濃度測定試劑盒、0.22μm注射器式濾膜。

使用方法：

一、洗滌包涵體
 說明：用常規(guī)方法得到的包涵體常常含有去污劑和細胞碎片，因此需要經(jīng)過充分的洗滌才能用于本實驗。
1．將10mg包涵體沉淀溶解在5mL包涵體洗滌液中，超聲波處理8次或充分吹打混勻?？梢赃m當留取10-30μL作為SDS-PAGE電泳樣品待用。
2．4℃ 12000rpm離心20分鐘后棄上清。
3．重復上面的洗滌步驟3次，每次留取10-30μL作為SDS-PAGE電泳樣品待用。
4．將包涵體沉淀溶解在1mL包涵體洗滌液中，超聲波處理8次或充分吹打混勻。
5．檢查包涵體的純度：將上步得到的包涵體溶液和前幾步得到的預留樣品一起用于SDS-PAGE電泳，檢查每次洗滌去除雜帶的情況。
6．檢查包涵體的濃度：用自備的BCA蛋白檢測試劑盒測試第4步得到的包涵體溶液的蛋白質(zhì)濃度。
7．將第4步得到的包涵體溶液的蛋白質(zhì)濃度調(diào)到5-10mg/mL(如果低于此范圍，則離心后用適量的洗滌液再溶解；如果高于此范圍，則用洗滌液稀釋)，然后均分到10個1.5mL塑料離心管中，每管100μl。
8．4℃ 12000rpm離心20分鐘后棄上清。
9．所得沉淀即純化的待用的包涵體。

二、確定溶解包涵體的zuì佳條件
1．標記上步得到的10個離心管，并分別加入10種包涵體溫和溶解液，每種1mL。注意：準確記錄它們的對應關系。
2．充分振蕩后，室溫放置30分鐘。
3．450nm檢測渾濁度并記錄下數(shù)據(jù)。
4．4℃ 12000rpm離心10分鐘后收集上清，此即包涵體溶解液。
5．用0.22μm注射器式濾膜過濾包涵體溶解液。
6．280nm檢測包涵體溶解液的光吸收。
7．溶解液溶解包涵體能力跟包涵體溶液濁度跟成反比，跟包涵體溶解液中OD280數(shù)值成正比。根據(jù)上面的數(shù)據(jù)即可確定哪種溶解液對實驗中所用包涵體具有zuì佳溶解能力，并將在此溶解液中溶解的包涵體溶解液用于下面的復性實驗。大量處理需要從本公司單獨大量訂購包涵體溫和型溶解液10種中的1種。

三、包涵體蛋白的復性
1．在2.5mL 4℃預冷的、處于輕柔攪拌中的復性緩沖液中，逐滴加入上步得到的包涵體溶解液。
2．待所有包涵體溶解液都加完后，將包涵體蛋白復性溶液用孔徑為0.22μm注射器式濾膜過濾，除去包涵體(直徑一般在0.5-0.8μm)和大的聚合物。
3．將得到的溶液用于活性檢測或離子交換柱層析和分子篩層析。

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貨號	名稱	規(guī)格
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WE0299	NC膜(0.22μM)	1 sheet
SNM406	彩虹預染蛋白Marker(10-250KD)	250ul
SNM416	膜蛋白和胞質(zhì)蛋白提取試劑盒	50T
SNM462	蛋白電泳預制膠(4-15%，10孔/15孔)	10塊/盒
SNM498	4%多聚甲醛(含DEPC)	500ml

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