Y1HGold酵母感受態(tài)細(xì)胞的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的克隆與表達(dá)產(chǎn)品，本制品用于科研目的，我公司的Y1HGold酵母感受態(tài)細(xì)胞品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。 主營產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

特別提示：包括Y1HGold酵母感受態(tài)細(xì)胞在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Y1HGold酵母感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱：Y1HGold Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號：MQ0063
產(chǎn)品規(guī)格：10×100μl/50×100μl

Y1HGold菌株是GAL4-AbA酵母單雜系統(tǒng)用菌株，MATα型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行篩庫試驗。
Transformation marker為：ura3，leu2；報告基因為：AbAr。Y1HGold-GAL4-AbA酵母單雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：pAbAi和PGADT7。
質(zhì)粒pAbAi的篩選標(biāo)志為URA，用于表達(dá)pBait-AbAi construct(1~3個 bait DNA 序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到pAbAi中)；質(zhì)粒PGADT7的篩選標(biāo)志為LEU，用于表達(dá)AD(GAL4 C端768 ~881位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Prey)的融合蛋白。
GAL4-AbA酵母單雜系統(tǒng)原理：Aureobasidin A(AbA)是一種環(huán)酯肽抗生素，在低濃度(0.1-0.2μg/ml)下即可對酵母產(chǎn)生毒性。
基因組中整合了pBait-AbAi的酵母菌株(Bait-Reporter Yeast Strains)，當(dāng)獵物蛋白(Prey)結(jié)合到誘餌序列(Bait DNA)上，GAL4 AD就會激活 AbAr的表達(dá)，從而能夠在含有抗生素AbA的培養(yǎng)基上生長。AbAr與營養(yǎng)缺陷報告基因相比具有更低背景的優(yōu)點，可以降低酵母單雜假陽性發(fā)生的概率。
Y1HGold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，經(jīng)pAbAi質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>103cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
MATα，ura3-52，his3-200，ade2-101，trp1-901，leu2-3，112，gal4Δ，gal80Δ，met–，MEL1
操作說明：
1.取pBait-AbAi質(zhì)粒5μg，BstBI或BbsI酶切1小時，回收。
2.取100 μl冰上融化的Y1HGold感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的線性 pBait-AbAi質(zhì)粒1-5μg(體積不高于15μl)，Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴，重復(fù)一次)10 μl，PEG/LiAc 500μl并吸打幾次混勻，30度水浴30分鐘(15 min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
3.將管放42度水浴15min(7.5 min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
4.5000 rpm離心40s棄上清，ddH2O 400μl重懸，離心30s棄上清。
5.ddH2O 50μl重懸，涂SD/-Ura平板,29℃培養(yǎng)72h。
6.挑取5-10個克隆，用PCR方法確定pBait-AbAi整合到Y(jié)1HGold基因組中，PCR陽性菌株在SD/-Ura平板劃線，29℃培養(yǎng)72h，4℃保存，此菌株即是Y1HGold[Bait/AbAi]菌株。
注意事項：
1.感受態(tài)細(xì)胞zuì好在冰上融化。
2.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
3.同時轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量。
4.Y1HGold酵母菌株對高溫敏感，zuì適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。
5.菌落變粉不是污染，是酵母細(xì)胞生長中一個常見現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞在平板培養(yǎng)幾天后，平板上的Adenine被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用，然而，Y1HGold的ADE2基因被破壞，Adenine合成途徑受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole(AIR)在細(xì)胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色。
6.酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克?。煌縎D單缺平板29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。

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貨號	名稱	規(guī)格
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名稱：大腸桿菌DB3.1化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
貨號：BTN140218
規(guī)格：10*100μl
本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DB3.1細(xì)胞含有g(shù)yrA462基因，對λ噬菌體的ccdB基因產(chǎn)物的毒性具有抵抗作用，特別適合用于轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增包含ccdB基因的質(zhì)粒載體。

產(chǎn)品特點：
1. 使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107，-80℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
2. DB3.1感受態(tài)細(xì)胞具有鏈霉素抗性。
3. DB3.1菌株基因型：F- gyrA 462endA1 Δ(sr1-recA)mcrB mrr hsdS20(rB-,mB-)supE44Ara-14 galK2 lac Y1 proA2 rpsL20(SmR)xy1-5 λ- leu mtl1
4. 本產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價廉。

儲存條件：干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。
自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養(yǎng)基等

使用方法：
1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。
以下實驗以100μL感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含有相應(yīng)抗生素的LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。

注意事項：
1、涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少，可通過離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

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