特別提示:包括總RNA提取試劑在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:總RNA提取試劑
英文名稱:Resgent (Trizol Substitute)
產(chǎn)品貨號:QN0927
產(chǎn)品規(guī)格:100mL|500mL
本試劑是一種通用的總RNA提取試劑,適用于動植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提,可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交,純化mRNA,體外翻譯,RNase保護(hù)實(shí)驗,RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。該試劑可用于100次總RNA提取(10平方厘米細(xì)胞或100mg組織)。
使用方法
自備新開封或?qū)S寐萬ǎng,異丙醇,75%乙醇,DEPC處理水。
1. 細(xì)胞裂解或組織勻漿:
1)貼壁細(xì)胞:吸盡培養(yǎng)液,每10平方厘米(6孔板孔或35 mm平皿)細(xì)胞加入1ml本試劑,使其覆蓋培養(yǎng)細(xì)胞,再用吸管或加樣器吹打2~3次,細(xì)胞應(yīng)完全裂解,然后轉(zhuǎn)移至離心管中。
2)懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,吸盡液體,每五百萬至一千萬(5×106~1×107)動植物或酵母細(xì)胞,或一千萬 (1×107)細(xì)菌,加入1ml本試劑 。用吸管或加樣器吹打,使其完全裂解。某些酵母和細(xì)菌如裂解不充分,可用勻漿器勻漿,以確保其完全裂解。轉(zhuǎn)移至離心管中。
3)組織:先將組織剪切成小塊,放入玻璃勻漿器內(nèi)。冷凍組織可在研缽中研磨勻漿。每50~100mg組織加入1ml本試劑 ,勻漿至完全裂解。轉(zhuǎn)移至離心管中。
裂解產(chǎn)物應(yīng)呈澄清的透明粘稠液體。室溫放置5分鐘。對于多糖、蛋白等雜質(zhì)豐富的組織樣品,勻漿后仍會存留有不溶物質(zhì),可12000g 4℃離心10分鐘,然后吸取上清至一新的離心管中。
2. 分離:在裝有裂解物的離心管中加入0.2倍體積的氯fǎng(1ml本試劑加入0.2ml氯fǎng),振蕩器上充分振蕩混勻30秒,室溫放置2-3分鐘。12000g 4℃離心10分鐘,然后吸取含總RNA的上層水相至一新的離心管中,每毫升本試劑 約可吸取0.5-0.6ml。有機(jī)相和中間層含有DNA和蛋白質(zhì),應(yīng)避免觸及。
3. 沉淀:按每ml本試劑加入0.5ml異丙醇,顛倒數(shù)次混勻,室溫沉淀10分鐘。12000g 4℃離心10分鐘,在管底可見RNA沉淀。棄上清,按每毫升本試劑加入1ml 75%乙醇,輕輕顛倒混勻,以清洗RNA沉淀。12000g 4℃離心2分鐘,棄去液體,小心勿丟棄RNA沉淀。室溫倒置晾干5~10分鐘。
4. 溶解:加入適量DEPC處理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。
注意事項:
1,RNA提取過程中所用器皿、離心管、吸頭等應(yīng)保證無污染無RNA酶。操作中應(yīng)小心,防止外源性RNA酶污染樣品導(dǎo)致RNA樣品降解。
2,試劑中含有酚等有害物質(zhì),注意個人防護(hù)。
儲存條件:4℃避光,有效期12個月
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