特別提示:包括類鼻疽伯克霍爾德菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:類鼻疽伯克霍爾德菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):SYA771
產(chǎn)品規(guī)格:48次/盒
一、簡(jiǎn)介
本試劑盒用一對(duì)類鼻疽伯克霍爾德菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)類鼻疽伯克霍爾德菌進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
二、用途
該試劑盒適用于檢測(cè)血液、痰、腦脊液、尿、濃性滲出物等樣品中的類鼻疽伯克霍爾德菌(BM),用于類鼻疽伯克霍爾德菌(BM)的輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考。
三、試劑盒組成(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
BM反應(yīng)液(BM-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
BM陽(yáng)性對(duì)照(BM-PTC) 1管 50μL/管
四、
熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他熒光定量PCR檢測(cè)儀。
五、
儲(chǔ)存條件及有效期:
本試劑盒于-20℃以下保存,有效期為6個(gè)月。
六、樣品前處理與
DNA提取
6.1 樣本前處理:
取抗血液、痰、腦脊液、尿、濃性滲出物。
6.2
DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說(shuō)明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
對(duì)上述處理好的樣本加入50uL核酸提取液,100℃恒溫處理10min,13000rpm離心5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。
七、
檢測(cè)步驟:
7.1
試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BM-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶液 1μL N×1μL
總量 15μL N×15μL
向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽(yáng)性對(duì)照(BM-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2
qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃ 延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX 參比熒光。
八、結(jié)果分析
8.1
結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?;€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整,以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2
試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對(duì)照(NTC):不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
(2) 陽(yáng)性對(duì)照(BM-PTC):均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
(3) 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則,此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
8.3
結(jié)果判定
(1) 在試驗(yàn)成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性,表明類鼻疽伯克霍爾德菌核酸陽(yáng)性。
(2) Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本,表明類鼻疽伯克霍爾德菌核酸陰性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品,先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,則為可疑陽(yáng)性,否則判為陰性。
(4) 對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品,重新抽提核酸,再次進(jìn)行類鼻疽伯克霍爾德菌qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,判為樣本陽(yáng)性,表明類鼻疽伯克霍爾德菌核酸陽(yáng)性;否則判為樣本陰性。
九、
注意事項(xiàng):
(1) 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
(2) 所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等),防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
根據(jù)您的關(guān)注的
類鼻疽伯克霍爾德菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒,類鼻疽伯克霍爾德菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒,SYA771,百奧萊博,,,您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求:
名稱:沙門(mén)氏菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào):SYA002
規(guī)格:48次/盒
一、簡(jiǎn)介
沙門(mén)氏菌(Salmonella)可引發(fā)人類、家畜以及野生禽獸不同形式的疾病。感染沙門(mén)氏菌的人或帶菌者的糞便污染食品,可使人發(fā)生食物中毒。據(jù)統(tǒng)計(jì)在各國(guó)的種類細(xì)菌性食物中毒中,沙門(mén)氏菌引起的食物中毒常列榜。本方法為熒光PCR檢測(cè)方法,反應(yīng)在同一管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行,操作簡(jiǎn)單,并有效防止了污染,能對(duì)樣品中或預(yù)培養(yǎng)液中的沙門(mén)氏菌進(jìn)行快速檢測(cè),具有特異性高、敏感性強(qiáng)和操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。沙門(mén)氏菌的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM,淬滅基團(tuán)為None。
二、用途
該試劑盒適合于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及食品中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)。
三、試劑盒組成(50T/Kit)
組份 數(shù)量 規(guī)格
沙門(mén)氏菌熒光qPCR反應(yīng)液(Sal-qPCR MIX) 1管 750μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
陽(yáng)性對(duì)照(Sal-PTC) 1管 50μL/管
四、
熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列,Bio-Rad系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。
五、
儲(chǔ)存條件及有效期:
本試劑盒于-18℃以下保存,有效期為6個(gè)月。
六、樣品采集與
DNA提取
6.1 樣品采集
6.1.1 食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品安家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)》(GB 4789.4-2010)要求進(jìn)行。
6.1.2 糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
6.1.3 病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
注:上述樣品建議經(jīng)過(guò)增菌后,收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。
6.2 DNA提取(用戶可根據(jù)需要選擇商業(yè)化DNA提取試劑盒)
6.2.1 培養(yǎng)物:取培養(yǎng)物50μL(培養(yǎng)至一定濁度)或者挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
6.2.2 糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
6.2.3 其他液體標(biāo)本:取標(biāo)本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注:陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。
七、
檢測(cè)步驟:
7.1
試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qPCR反應(yīng)液(Sal-qPCR MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 15μL N×15μL
向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽(yáng)性對(duì)照(Sal-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2
qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。
八、結(jié)果分析
8.1
結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?;€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整,以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2
試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對(duì)照(NTC):不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
(2) 陽(yáng)性對(duì)照(Sal-PTC):均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
(3) 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則,此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
8.3
結(jié)果判定
(1) 在試驗(yàn)成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性,表明Sal核酸陽(yáng)性。
(2) Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本,表明Sal核酸陰性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品,先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,則為可疑陽(yáng)性,否則判為陰性。
(4) 對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品,重新抽提核酸,再次進(jìn)行Sal qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,判為樣本陽(yáng)性,表明Sal核酸陽(yáng)性;否則判為樣本陰性。
九、
注意事項(xiàng):
(1) 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
(2) 所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等),防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

關(guān)注
類鼻疽伯克霍爾德菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒,類鼻疽伯克霍爾德菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒,SYA771,百奧萊博,,的同時(shí),為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品:
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