特別提示:包括羅丹明標記鬼筆環(huán)肽在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:羅丹明標記鬼筆環(huán)肽
英文名稱:TRITC Phalloidin
產(chǎn)品貨號:SY0565
產(chǎn)品規(guī)格:300T|1mg
本品為TRITC(四甲基異硫氰酸羅丹明)標記的鬼筆環(huán)肽,染色反應(yīng)特異性強,對比性高,具有比Actin抗體更好的染色效果,適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外,經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。且本品的結(jié)合沒有物種差異性,適用性廣泛。
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)的環(huán)狀七肽毒素,以高親和力(Kd= 20 nM)選擇性結(jié)合于絲狀肌動蛋白F-actin,而不會與單體肌動蛋白G-actin結(jié)合,通常用來標記組織切片,細胞培養(yǎng)物或無細胞體系中的F-actin,從而對F-actin進行定性和定量分析。另外,鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維,無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞,按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環(huán)肽分子的計量比結(jié)合。且非特異性結(jié)合幾乎可忽略,染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識度非常明顯。因此,鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動蛋白(Actin)抗體進行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小,直徑約12-15?,分子量<2000 Daltons,未標記肌動蛋白(Actin)的許多生理特性都得以維持,比如,同肌動蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng);鬼筆環(huán)肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì);以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)的結(jié)合阻止絲狀肌動蛋白(微絲)的解離,穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu),從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度(CC)降至<1μg/mL,因此,可用作一種聚合促進劑。此外,鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
分子式:C60H70N12O13S2
分子量:1231.4
zuì大激發(fā)/發(fā)射波長:540~546/565~575nm
多肽序列:TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)
外觀:紫色粉末(凍干粉)
溶解性:溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液(20%)
儲存條件:-20℃,有效期一年
根據(jù)您的關(guān)注的
羅丹明標記鬼筆環(huán)肽,羅丹明標記鬼筆環(huán)肽,SY0565,百奧萊博,,,您可能還對以下產(chǎn)品有需求:
貨號
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名稱
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規(guī)格
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YT358
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50微升
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關(guān)注
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本試劑盒是基于TdT末端轉(zhuǎn)移酶能夠在DNA的3′端添加dNTP尾巴的原理而設(shè)計,該反應(yīng)的示意圖如下:
產(chǎn)品特點:
1.快速,15分鐘即可完成標記反應(yīng)。
2. 不但可用于單鏈DNA和DNA Oligo標記,還可用于3′突出的雙鏈DNA標記,但后者標記效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地gāo辛標記的核苷酸等)。
4. 提供不帶標記核苷酸、帶生物素標記核苷酸和帶地gāo辛標記核苷酸三種選擇。
5. 同時提供非標記的dATP,用戶可以用其調(diào)節(jié)加尾長短和標記核苷酸摻入比例。
6. 標記的探針可用于電泳遷移率實驗(EMSA)、原位雜交(ISH)、Northern Blot(不推薦用于低豐度RNA檢測)、小RNA Northern、Southern Blot(不推薦用于單拷貝基因檢測)、菌落雜交、斑點印跡雜交分析等。
試劑盒組成:
成分
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規(guī)格
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TdT緩沖液,5×
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20μl
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TdT(末端轉(zhuǎn)移酶,10U/μL)
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10μl
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dATP,2mM
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5μl
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標記核苷酸
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(A、B、C不同,見注)
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超純水
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1ml
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說明書
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1份
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注:A型用于自選標記,用戶需自備標記核苷酸,本產(chǎn)品不提供標記核苷酸;B型提供5μl Biotin-11-dUTP;C型提供含5μl DIG-11-dUTP。
儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在0.2mL微量離心管中按下表設(shè)置一個20μl體系的標記反應(yīng)(如果需要標記更多探針,請增加標記體積而不要增加探針DNA的濃度):
成份
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用量
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探針DNA
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100-200 pmol
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TdT Buffer,5×
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4μl
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標記核苷酸,1mM
(A型需自備標記核苷酸)
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1μl
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dATP,2mM
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(見下注)
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TdT末端轉(zhuǎn)移酶(10U/μL)
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2μl
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超純水
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補到20μl
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注:dATP可以不加,但這樣得到的加尾全部是標記核苷酸,由于空間阻礙,靈敏度不一定zuì佳。如果雜交效果不好,摻入一定比例的dATP到標記核苷酸中,以控制標記的密度,提高比活。具體比例如何可以自己優(yōu)化。
2. 37℃反應(yīng)15分鐘,延長到30分鐘也可以。如果沒有非標記核苷酸存在,一般可以加尾3-5個Biotin或DIG標記的核苷酸(標記物空間阻礙抑制延長);如果有在加尾反應(yīng)中加入一定比例的非標記核苷酸dATP(其他dNTP也可,只是本試劑盒只提供dATP而已),每條探針上可加上約100個核苷酸,平均含5個標記核苷酸
3. 70℃ 10分鐘滅活TdT酶。
4. 如果需要,可以PAGE電泳+銀染(相關(guān)試劑需要另購)檢測標記效率,帶標記的探針泳動速度將低于沒標記的探針。
5. 如果是非同位素標記,探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非同位素標記的探針,請不要酚/lǜ仿抽提,因為非同位素標記物一般會使探針DNA進入有機相而丟失。
6. 使用時需將探針以1-8 ng/μL的終濃度加入到雜交液中(如果探針是雙鏈DNA,加入前還需熱變性)。如果不立即使用,非同位素標記的探針DNA可-20℃長期放置一年,同位素標記的探針DNA不能放置。
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