特別提示:包括非變性蛋白電泳預(yù)制膠(4-20%,15孔)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:非變性蛋白電泳預(yù)制膠(4-20%,15孔)
英文名稱:Native PAGE Gel 4-20%, 15 wells
產(chǎn)品貨號(hào):QN2765
產(chǎn)品規(guī)格:10塊
本預(yù)制膠是我公司開發(fā)的高性能低成本Native PAGE預(yù)制凝膠。預(yù)制膠將凝膠事先配制好,使用者拿來即可上樣進(jìn)行電泳,減去了用戶自配凝膠的麻煩,節(jié)約了大量的時(shí)間。本預(yù)制膠默認(rèn)送Running buffer,預(yù)制膠一定要用我們贈(zèng)送的running buffer作為電泳緩沖液,其他的緩沖液不匹配。
產(chǎn)品特點(diǎn):
·特制凝膠和緩沖液配方,分辨率高,條帶清晰,電泳效果佳。
·保存期長(zhǎng),4℃儲(chǔ)存達(dá)到18個(gè)月膠夾打開為輕松,無需起撬工具。
·兼容目前市場(chǎng)各種電泳槽,如BIORAD,六一,天能和君意東方等。
·可用于SDS非變性電泳。
·10%,12%,15%及4-15%梯度等多種不同濃度供選擇,1.5mm膠厚度。
·電泳時(shí)間短,在150V電壓下,電泳40-50分鐘即可完成。
·出售時(shí)附送足量的電泳緩沖液。
·玻璃電泳板蛋白吸附率低,電泳效果更好。
產(chǎn)品參數(shù):
膠板尺寸:9.8×8.4×0.41cm
凝膠尺寸:8.1×7.4×0.15cm
濃度:4~20%
分離范圍:200Da~3.5KDa
孔數(shù):15wells
上樣量:60μl
應(yīng)用:Western blot
保存:4℃,有效期18個(gè)月
根據(jù)您的關(guān)注的
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名稱:一站式GST標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝(含溶菌酶和核酸酶)
貨號(hào):BTN111116B
規(guī)格:20次
重組蛋白N端的GST谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶能提高重組蛋白的水溶性,所以常用于蛋白質(zhì)重組表達(dá)。GST-谷胱甘肽親和層析是利用GST 標(biāo)記的蛋白能與谷胱甘肽層析介質(zhì)結(jié)合,并能被還原型谷胱甘肽洗脫的特點(diǎn)而建立,是目前分離純化GST 標(biāo)記蛋白質(zhì)的重要方法。本產(chǎn)品就是專門用于上述目的,其原理如下:
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.一站式套裝,含所需的谷胱甘肽介質(zhì)、溶液和層析柱,用戶只需要提供表達(dá)GST 標(biāo)記蛋白的細(xì)菌(酵母、桿狀病毒、培養(yǎng)細(xì)胞)即可,非常方便。
2.專一性強(qiáng),一次過柱即可獲得純度高達(dá)95%的GST-標(biāo)記蛋白。
3.只能在非變性條件下使用,只可用于純化沒形成包涵體的GST 標(biāo)記蛋白。
4.每次可以處理20mL的表達(dá)菌液,適合初步篩選和鑒定。
5.提供4mL濃度為50%的谷胱甘肽-Agarose 介質(zhì),可吸附5-10mg GST 標(biāo)記蛋白質(zhì)。
6.本介質(zhì)可以反復(fù)使用多次。
試劑盒組成:
成分
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20次(A)
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20次(B)
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谷胱甘肽-Agarose介質(zhì),50%
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4ml
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4ml
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10×PBS緩沖液
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100ml
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100ml
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溶液A
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1ml
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無
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GST洗脫緩沖液成分一
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25ml
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25ml
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GST洗脫緩沖液成分二
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約80mg
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約80mg
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溶菌酶(20KU/mg)
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無
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30mg
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Benzonase(2U/μL)
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無
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20μl
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PMSF(10mg/mL)
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0.5ml
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0.5ml
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6mL層析柱(帶篩板)
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1套
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1套
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說明書
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1份
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1份
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儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸和保存,溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低溫運(yùn)輸。收到貨后,介質(zhì)需4℃保存,溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
注意:
1.每步得到的樣品zuì好都留存少量作為SDS-PAGE分析的對(duì)照,在下面描述中就不再提醒。
2.本實(shí)驗(yàn)需要用到的1×PBS緩沖液可用自備的超純水稀釋本試劑盒提供的10×PBS緩沖液而得。PBS緩沖液用超純水稀釋后其容易長(zhǎng)細(xì)菌,注意防止污染。
3.GST 洗脫液的配制方法是將約80mg GST 洗脫液成分二干粉全部加入到GST 洗脫液成分一溶液中,搖晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脫液,分裝成小份放-20℃保存,每次用一管。
一、
重組蛋白的表達(dá)和細(xì)菌收集
1.37℃振蕩培養(yǎng)20mL含表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)菌到OD600=0.6-0.8。
2.加IPTG 到終濃度為0.1mM,30℃振蕩培養(yǎng)3小時(shí)或22℃振蕩培養(yǎng)8小時(shí)(或過夜)。
3.4℃ 5000g離心10分鐘收集20mL表達(dá)菌液,棄上清。
4.用1×PBS緩沖液重懸細(xì)菌沉淀,4℃ 5000g離心10分鐘,棄上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
二、
細(xì)胞裂解
5.如果用本產(chǎn)品A型,用1mL冰浴的新鮮配制的細(xì)胞裂解液(1mL 1×PBS緩沖液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重懸細(xì)菌沉淀,冰上超聲裂解菌體直到在顯微鏡下看見大多數(shù)細(xì)胞破裂。超聲參數(shù)需根據(jù)儀器型號(hào)自行摸索,一般選1K-10K 頻率處理15次,每次20秒,間隔1分鐘(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否則會(huì)堵塞層析柱。
6.如果用本產(chǎn)品B型,在1mL冰浴的新鮮配制的細(xì)胞裂解液(在20mL 1×PBS緩沖液中加入所有30mg 溶菌酶干粉,溶解后分裝成1mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase,用此混合液重懸細(xì)菌沉淀后冰上放置30分鐘,得到細(xì)菌裂解物。
7.將超聲或酶法細(xì)胞裂解物在13000 g 4℃離心10分鐘去除未裂解細(xì)胞和裂解細(xì)胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性GST 標(biāo)記蛋白。
三、
層析柱的制備和GST蛋白純化
8.搖晃將谷胱甘肽-Agarose 介質(zhì)充分混勻后,取適量加入到預(yù)放了一片篩板的層析柱中(介質(zhì)用量需要根據(jù)GST蛋白產(chǎn)量決定,100mL菌液一般使用200μL介質(zhì)即可)。下列步驟各溶液的用量均針對(duì)200μL介質(zhì)而定,如果介質(zhì)用量不同,各溶液用量需相應(yīng)調(diào)整。
9.用5mL預(yù)冷的1×PBS緩沖液洗柱。
10.將第7 步得到的上清液(含可溶性GST標(biāo)記蛋白)上柱,讓重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于SDS-PAGE電泳。GST和谷胱甘肽之間的結(jié)合很緩慢,所以流速一定不能快,否則結(jié)合不充分。流速一般在0.2-1mL/分鐘即可。如要提高GST 標(biāo)記蛋白與介質(zhì)的結(jié)合效率,可用本試劑盒提供的紅蓋將層析柱下的漏液口堵上,讓細(xì)菌裂解液和介質(zhì)在4℃結(jié)合30分鐘或過夜。也可以將穿透液反復(fù)上柱。
11.用0.5-2mL 1×PBS緩沖液洗柱,收集并保存穿透液(含雜蛋白)。
12.用0.2-1mL GST洗脫液洗柱,收集并保存穿透液(含GST 標(biāo)記蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在4℃放置,需立即用于后續(xù)處理(如濃度測(cè)定或SDS-PAGE電泳)或-80℃長(zhǎng)期放置。
13.對(duì)收集的2種穿透液和洗脫液進(jìn)行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意:如果不預(yù)先脫鹽,則只能用Bradford法或OD 檢測(cè)法(1 OD280 約等于0.5mg/mL蛋白)測(cè)定穿透液和洗脫液的蛋白濃度。由于GST的分子量為26 KD,所以在SDS-PAGE膠上,GST 標(biāo)記蛋白將比天然蛋白大26 KD。
附:GST柱的恢復(fù)(本試劑盒不含所需試劑)
1.用3倍體積的6M鹽酸胍處理柱子10分鐘。
2.用3倍體積的超純水處理柱子10分鐘。
3.用3倍體積的緩沖液一(0.5M NaCl,0.1M Tris·HCl,pH8.5)處理柱子10分鐘。
4.用3倍體積的緩沖液二(0.5M NaCl,0.1M Tris·HCl,pH4.5)處理柱子10分鐘。
5.再重復(fù)3-4 步兩次。
6.用3倍體積的超純水處理柱子3次。
7.用3倍體積的1×PBS緩沖液處理柱子2次。
8.堵上漏口,加3倍體積的1×PBS緩沖液待用。若長(zhǎng)時(shí)間不用,則第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。
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關(guān)注
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名稱
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規(guī)格
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BTN100939
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福林酚試劑
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100mL
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SNM375
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5×雙色Loading buffer上樣緩沖液
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5ml
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SNM391
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蛋白酶抑制劑混合物(100×)
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1ml
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ALH371
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改良BCA法蛋白定量試劑盒
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200次|500次|2500次|5000次
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SY0322
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預(yù)活化正釩酸鈉溶液
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5ml (200mM)
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SY0323
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蛋白酶抑制劑Cocktail,EDTA-free,迷你型,片劑
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1瓶(10片)|1瓶(50片)
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