特別提示:包括柱式軟體動物DNA提取試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:柱式軟體動物DNA提取試劑盒
英文名稱:Mollusc DNA column extraction kit
產(chǎn)品貨號:BTN101111
產(chǎn)品規(guī)格:50次
本試劑盒是專門用于從各種軟體動物組織中提取基因組DNA的試劑盒。其原理是基于陽離子去垢劑CTAB在適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度條件下,特異地跟基因組DNA 結(jié)合形成沉淀,然后在用硅膠膜技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步純化。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.適用于用常規(guī)方法難以提取的、各種富含多糖的軟體動物動物,包括螺類、貝類、烏賊、章魚和蝸牛等。
2. 提取到的基因組DNA 完整性,其中zuì長可以到達(dá)長度一般在20-50kb。
3. DNA 純凈,OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右,可直接用于PCR、酶切、雜交等。
4. 操作簡單,整個過程約30分鐘。
5. 安全,本試劑盒對人體,無腐蝕性和刺激性氣味。
6. 價廉物美,與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當(dāng),但價格。
試劑盒組成:
成分
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規(guī)格
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溶液A
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50ml
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溶液B
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50ml
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溶液C
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100ml
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RNase A(10mg/mL)
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150μl
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離心吸附柱
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50套
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通用洗柱液
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50ml
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DNA洗脫液2.0
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10ml
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說明書
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1份
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儲存條件:常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。
使用方法:
1. 勻漿方法一:稱取0.1-0.3g軟體動物組織,轉(zhuǎn)移到塑料研缽中,液氮研磨成粉后轉(zhuǎn)移到一個干凈的1.5mL塑料離心管中。注意:zuì好避免使用含二氧化硅的玻璃研缽,因為DNA 會吸附在表面,影響得率。在離心管中加入1mL 65℃預(yù)熱的溶液A并用移液槍頭充分吹打混勻(如果溶液A有沉淀,需先在65℃加熱溶解后搖勻再使用)。進(jìn)入第三步。
2. 勻漿方法二:將0.1-0.3g軟體動物組織剪成小塊,轉(zhuǎn)移到10-15mL塑料管中(培養(yǎng)細(xì)菌那種離心管即可),加入1mL 65℃預(yù)熱的溶液A,用Polytron 式勻漿機(jī)(剪切式勻漿機(jī))勻漿1分鐘左右。
3. 65℃保溫5-30分鐘,其間zuì好吹打混勻2-3次。
4.轉(zhuǎn)移到新的1.5mL離心管中,12000~15000g室溫離心3分鐘。
5. 將不超過0.75mL的上清轉(zhuǎn)移到新離心管中。有時候上清液中還會有少量細(xì)小懸浮物,但對后續(xù)操作沒有影響,不必進(jìn)行特殊處理。
6.在上清液中加入等體積的溶液B,上下顛倒30秒充分混勻,溶液將呈白色混濁狀。
7. 將其置于冰浴中放置5-10分鐘。
8. 12000~15000g室溫離心3分鐘,轉(zhuǎn)移上清到新的1.5mL塑料離心管中。
9. 加入0.2mL的氯fǎng(自備),震蕩器上充分振蕩30秒混勻。
10. 12000~15000g室溫離心3分鐘,兩相交界面將有白色膜狀物,小心轉(zhuǎn)移上清到新1.5-5mL塑料離心管中。注意:由于下一步要加1.5倍體積的溶液C,所以新的離心管的體積要足夠大。
11. 加入1.5倍體積的溶液C,上下顛倒30秒混勻,然后分多次的將混合液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。
12. 每次轉(zhuǎn)移0.7-0.8mL 混合液后,室溫放置5-10分鐘。
13. 12000~15000g室溫1分鐘,棄穿透液。
14. 對需要多次上柱的樣品,可以在此將剩余的樣品加到離心吸附柱式中,重復(fù)第12-14 步的操作。
15. 將0.7mL 通用洗柱液加入離心柱,室溫離心1分鐘,棄穿透液。
16.在離心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,12000~15000g離心半分鐘(此步為第二次洗滌)。
17. 空甩1分鐘去除殘留液體。
18. 將離心柱放置在一新的1.5mL塑料離心管中,加入30-100μL DNA 洗脫液2.0。
19.室溫放置5分鐘后離心1分鐘,管底即為軟體動物DNA溶液,可立即使用,也可長期保存在-20℃。
20.可以重復(fù)上步一次,以洗脫更多的DNA(第二次洗脫的DNA一般有次的30%左右)。
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