轉(zhuǎn)膜液(Western)，NC由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研目的，我公司的轉(zhuǎn)膜液(Western)，NC品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營(yíng)血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國(guó)內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長(zhǎng)期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。

特別提示：包括轉(zhuǎn)膜液(Western)，NC在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)膜液(Western)，NC
產(chǎn)品貨號(hào)：HR8135
產(chǎn)品規(guī)格：100ml|500ml



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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
BTN131048	膽酸鈉	5g
WE0259	蛋白酶抑制劑混合物	1ml
SNM389	RIPA裂解液(高強(qiáng)度)	100ml
SNM396	TBS緩沖液(20×)	500ml
SNM407	抗體孵育膜	100張/包
SNM431	抗體清除液	500ml
ALH375	改良Bradford法蛋白定量試劑盒	1000次|2500次

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名稱：包涵體中量純化試劑盒
貨號(hào)：BTN90509
規(guī)格：5次
本產(chǎn)品是我們公司包涵體微量純化試劑盒(BTN90508)的中量提取升級(jí)產(chǎn)品，用于中量，快速的提取高質(zhì)量的包涵體。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．中量提取，一次可以處理30-50mL的菌液，一次中量提取相當(dāng)于10-20次微量提取。
2．操作簡(jiǎn)單快速，整個(gè)過(guò)程只要四十分鐘左右。
3．大規(guī)模提取，可以在15-50mL離心管中完成。
4．能有效去除包涵體中的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜等非重組蛋白成份，使重組蛋白所占比重達(dá)到60%以上。
5．細(xì)胞裂解通過(guò)非離子洗滌劑的化學(xué)裂解法，裂解更加溫和。
6．得到的包涵體可以用于重折疊。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	25ml
溶液B	250ml
包涵體溶解液	25mL
溶菌酶	3g
Benzonase(1U/μL)	125μl
說(shuō)明書	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸及保存，但溶菌酶和Benzonase需要低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

準(zhǔn)備工作：
將3g溶菌酶全部加入到25mL溶液A中溶解，然后根據(jù)每次的需要量(一次大量提取需要5mL)分成1mL/只放-20℃待用。每次只取用一管含溶菌酶的溶液A。
包涵體中的重組蛋白一般比溶解狀態(tài)中的蛋白質(zhì)更能夠抵抗微量?jī)?nèi)源性蛋白水解酶的降解，如果實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)得到的重組蛋白確有降解，則需要在溶液A中新鮮加入自備的蛋白酶抑制劑混合物(BTN80808)。

一、細(xì)胞裂解和包涵體的純化：
1．在蛋白誘導(dǎo)期結(jié)束時(shí)，轉(zhuǎn)移30mL菌液到一個(gè)干凈的塑料離心管中。
2．5000-7,000rpm室溫離心3分鐘，小心棄上清。
3．加入5mL含溶菌酶的溶液A重懸細(xì)胞。
4．室溫放置10-20分鐘裂解細(xì)菌，其間可以用手輕彈離心管混勻。
5．-20℃冷凍至凝固。凝固有利于裂解細(xì)菌，所以一定要凝固到細(xì)菌溶液變成固體。
6．室溫水浴解凍。如果裂解充分，細(xì)菌釋放出的DNA將使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，說(shuō)明裂解不充分，需要重復(fù)3-6步，否則完整細(xì)菌將和包涵體一起沉淀，影響包涵體的純度。如有條件zuì好在顯微鏡下檢查細(xì)菌是否充分裂解。
7．加入25μL的Benzonase(1U/μL)，脫色搖床上搖晃直到裂解液不再粘稠，一般需要30分鐘左右(檢查方式是將裂解物傾倒轉(zhuǎn)移到另一離心管中，在轉(zhuǎn)移過(guò)程中看其是否粘稠)。
8．5000-7,000rpm 4℃離心5分鐘，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重組蛋白，可以保留作為SDS-PAGE對(duì)照樣品。
9．將沉淀(主要由包涵體構(gòu)成)懸浮在25mL的溶液B中，輕柔混勻后室溫放置5分鐘。
10．5000-7,000rpm 4℃離心10分鐘，小心收集上清,可以作為包涵體次洗滌的對(duì)照樣品。
11．將沉淀(主要由包涵體構(gòu)成)懸浮在25mL的溶液B中，輕柔混勻后室溫放置5分鐘。
12．5000-7,000rpm 4℃離心10分鐘，小心收集上清作為包涵體第二次洗滌的對(duì)照樣品。一般洗滌兩次就能夠得到足夠純凈的包涵體，如果需要更多洗滌，需要用戶單獨(dú)購(gòu)買包涵體洗滌液(溶液B)。
13．得到的沉淀即為包涵體，可以長(zhǎng)期放置在冰箱待用或直接進(jìn)入包涵體的溶解步驟。

二、包涵體的溶解：
1．在包涵體沉淀中加入5mL包涵體溶解液，用槍頭充分吹打后漩渦震蕩。如果低溫放置，包涵體溶解液會(huì)產(chǎn)生沉淀，必須45-65℃溶化并混勻后才能使用。
2．室溫放置1小時(shí)使蛋白質(zhì)充分溶解。
3．20000g 4℃離心20分鐘，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：檢查離心管能否承受此離心力。SDS-PAGE檢查是否大部分重組蛋白都在上清中。如果沒(méi)有，說(shuō)明包涵體沒(méi)有完全溶解，需要用適當(dāng)增加包涵體溶解液的用量。
4．得到的蛋白質(zhì)溶液可以用于復(fù)性等試驗(yàn)。由于不同的蛋白質(zhì)有不同的zuì佳復(fù)性條件，所以本公司不能提供統(tǒng)一的復(fù)性溶液，需要用戶自己摸索。
 注意：包涵體純化過(guò)程中引入了溶菌酶、DNase和RNase等外源蛋白質(zhì)，在SDS-PAGE分析時(shí)可能有額外條帶出現(xiàn)。

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