BL21感受態(tài)細(xì)胞是高品質(zhì)的克隆與表達(dá)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要BL21感受態(tài)細(xì)胞等克隆與表達(dá)產(chǎn)品的客戶(hù)，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專(zhuān)業(yè)的生物試劑銷(xiāo)售公司。公司主要經(jīng)營(yíng)血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專(zhuān)業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以?xún)?yōu)良的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿(mǎn)足客戶(hù)的各方面的需求，與國(guó)內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長(zhǎng)期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。

特別提示：包括BL21感受態(tài)細(xì)胞在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：BL21感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱(chēng)：BL21（DE3) Competent E.coli
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0188
產(chǎn)品規(guī)格：100 μl×5|100 μl×10

本制品是采用大腸桿菌BL21（DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10⁷，-70℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實(shí)驗(yàn)的成本。質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。

該菌株用以T7 RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。

基因型：F- ompT hsdSB（rB- mB-) gal dcm（DE3）

保存條件：-70℃凍存，有效期6個(gè)月。

操作步驟：（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
注意：一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。以下實(shí)驗(yàn)以100μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100μl的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和)，輕彈混勻，在冰浴中靜置30min。
3．將離心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 min，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
注意：此步驟也可將離心管置于室溫進(jìn)行，時(shí)間不需十分準(zhǔn)確，夏季或室溫較高時(shí)，可放置5-8 min左右，如果室溫較低，可延長(zhǎng)時(shí)間至8-15 min左右。條件允許建議使用42℃熱激方法。
4．向每個(gè)離心管中加入900 μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45 min（150rpm)，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5．將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100μl已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16h。
注意：涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過(guò)離心（4000 rpm,2 min)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)。

注意事項(xiàng)：
1.感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2.進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3.為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zuì低。

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貨號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格
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