特別提示:包括葡聚糖凝膠LH-20在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:葡聚糖凝膠LH-20
英文名稱:Sephadex LH-20
產(chǎn)品貨號(hào):QN4110
產(chǎn)品規(guī)格:25g|100g|500g
Sephadex G型葡聚糖凝膠只適合在水相中使用,羥基化得到的Sephadex LH-20適合用于有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子,在有機(jī)溶劑中純化天然產(chǎn)物。利用分子篩作用,適合用有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子,可以非常經(jīng)濟(jì)地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物;如:類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等
葡聚糖凝膠LH-20分離主要以凝膠過(guò)濾為主,兼具反相分配的作用。在凝膠過(guò)濾的作用下,大分子化合物的保留力弱,先被洗脫下來(lái),分子zuì小的zuì后出柱;在反相洗脫溶劑中,起反相分配作用,性大的物質(zhì)的保留弱先被洗脫,性小的化合物后出柱
技術(shù)參數(shù):
性狀:多孔,白色微球
基質(zhì):交聯(lián)葡聚糖
粒徑:100~200目
工作pH:2~11
操作溫度:4~40℃
球蛋白分離范圍:100~4000
排阻限:4~5kd(與所用溶劑有關(guān))
保存條件:4~25℃
使用說(shuō)明:
1.凝膠懸浮液的制備
將干粉浸泡于60-70%乙醇中,充分?jǐn)嚢柽^(guò)夜,洗去可能存在的殘留物,根據(jù)自己的洗脫液平衡層析至少兩個(gè)柱體積直到基線平穩(wěn)為止。
2.洗脫溶劑
如果樣品性大,選用反相溶劑洗脫(甲醇-水),樣品用zuì少體積的甲醇-水溶解,過(guò)濾上柱;如果樣品性小,選用lǜ仿-甲醇正相洗脫。
3.樣品處理
用盡量少的洗脫試劑溶解樣品,常壓過(guò)濾。
4.濕法上柱
5.洗脫
控制流速,一般小于1drop/s。
6.再生以后下次使用
根據(jù)您的關(guān)注的
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規(guī)格:25ml
苯基-瓊脂糖凝膠H.P.是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。本品為白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見雜質(zhì)。
技術(shù)參數(shù):
配基:R-OCH2-CH(OH)-CH2-O-C6H5
基質(zhì):6%交聯(lián)瓊脂糖
粒徑:24~44μm
配基密度:25μmol苯基/mL介質(zhì)
推薦流速:zuì高100cm/h(內(nèi)徑16mm、柱長(zhǎng)10cm,柱床高5cm,25℃,流動(dòng)相為0.1mol/L NaCl)
耐壓:0.15MPa
工作溫度:4~40℃
pH適用范圍:2~14(短時(shí)間,在位清洗);3~13(長(zhǎng)時(shí)間)
化學(xué)穩(wěn)定性:1mol/L醋酸、8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍、30%異丙醇、70%乙醇、2%SDS,在以上溶液中穩(wěn)定
保存:密封貯存在4~30℃(保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉),通風(fēng)、干燥、清潔的地方,不能冷凍,保質(zhì)期5年,用過(guò)的柱子貯存在4℃(20%乙醇)。
操作步驟:
1.裝柱
① 讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
② 根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。
③ 將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
④ 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
⑤ 打開蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò),使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3.上樣
① 樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
② 一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
③ 介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng),介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。
4.洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。zuì常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS。
5.再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
6.在位清洗
① 對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
② 對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,可用1M NaOH去除。
③ 對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7.注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。
8.去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)?;蛴靡韵路椒ú襟E去除:
① 2倍柱體積的70%乙醇;
② 2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5;
③ 1倍柱體積4M尿素;
④ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M NaCl;
上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
9.消毒 用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。
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關(guān)注
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