特別提示:包括DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱(chēng):DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱(chēng):DH5α Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào):MQ0001
產(chǎn)品規(guī)格:20×100μl/100×100μl
DH5α菌株是實(shí)驗(yàn)室zuì常用的感受態(tài)細(xì)胞。缺失核酸內(nèi)切酶(endA),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩(wěn)定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選。
DH5α菌株的缺點(diǎn)是生長(zhǎng)緩慢,37℃需培 12-14小時(shí)才能看見(jiàn)克隆;如需加快試驗(yàn)速度,請(qǐng)選用TG1,Mach1-T1,XL10-Gold等生長(zhǎng)速度快的感受態(tài)細(xì)胞。
DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率約1×109cfu/μg。
保存條件:-80℃
基因型:F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F)U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+)supE44λ-thi-1 gyrA96 relA1 phoA
操作說(shuō)明:
1.DH5α感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中),加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少17h。
注意事項(xiàng):
1.感受態(tài)細(xì)胞zuì好在冰上融化。
2.混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚵实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
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關(guān)注
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名稱(chēng)
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規(guī)格
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