PMSF(100mM)是高品質(zhì)的蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應，本產(chǎn)品用于生化實驗研究等領域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要PMSF(100mM)等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術服務，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關系，擁有較好的企業(yè)信譽和品牌形象。

特別提示：包括PMSF(100mM)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：PMSF(100mM)
英文名稱：Phenylmethanesulfonyl fluoride
產(chǎn)品貨號：SNM408
產(chǎn)品規(guī)格：1ml



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貨號	名稱	規(guī)格
BTN100829	中pH緩沖液套裝	30次
SNM406	彩虹預染蛋白Marker(10-250KD)	250ul
KFS018	Oct-4免疫組化試劑盒(IHC)	50T
KFS063	WB抗體清除液(中性,去污劑法）	500ml
SY0320	10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制劑)	100ml
SY0341	40%丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺，37.5:1	500ml

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名稱：非變性法蛋白沉淀試劑盒
貨號：BTN81029
規(guī)格：10次
本產(chǎn)品是基于蛋白質(zhì)鹽析和透析原理開發(fā)的非變性蛋白質(zhì)濃縮產(chǎn)品。其原理是將大量具有很強水化能力的硫酸銨加到蛋白質(zhì)溶液中，奪取蛋白質(zhì)分子的水化層(尤其是蛋白質(zhì)表面非性區(qū)的水化層)，使之“失水”，于是蛋白質(zhì)分子間的非性基團將互相結合，使蛋白質(zhì)形成沉淀，離心分離沉淀后，再用透析方法將蛋白質(zhì)中的鹽除去，即得濃縮的蛋白質(zhì)。

產(chǎn)品特點：
1.適合于濃縮各種蛋白質(zhì)粗提液，一次可以處理50mL蛋白質(zhì)溶液。
2. 非變性法，不會破壞蛋白質(zhì)的天然結構和活性，尤其是適用于對變性敏感的酶溶液。
3. 得到的蛋白質(zhì)結構穩(wěn)定，適合于長期保存。
4.可以在透析是進行緩沖液的調(diào)換。
5.一站式，帶有鹽析和透析所需的物品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml×10
無菌水	50ml
EDTA溶液(0.5M)	0.5ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：除對溫度敏感的蛋白質(zhì)樣品需在4℃環(huán)境下(如冷室)操作外，一般可在室溫中操作，操作者整個操作須戴好手套。

鹽析沉淀
1．測量待濃縮蛋白質(zhì)樣品的體積，并將其轉(zhuǎn)移到容積至少是樣品體積兩到三倍的無菌燒杯或玻璃三角瓶中。注意：需要處理的蛋白質(zhì)樣品zuì好溶解在pH為中性的緩沖液中(如50mM的Tris-HCl)，濃度zuì好在1mg/mL以上。
2．將一個無菌的磁力攪拌子放入三角瓶中，再將三角瓶放置在磁力攪拌器上，打開開關后緩慢攪拌。注意：攪拌過程中不能產(chǎn)生泡沫。
3．如果待濃縮蛋白容易被金屬離子失活或抑制，則zuì好加入EDTA溶液，使其終濃度為10mM，否則此步可省略。
4．根據(jù)所需硫酸銨的飽和度計算需要加入的溶液A的體積，溶液A的硫酸銨飽和度是。一般50%的硫酸銨飽和度就可以沉淀大部分蛋白，超過此飽和度溶液比重很大，難以通過離心收集蛋白質(zhì)沉淀。
5．小心緩慢加入所需的溶液A(用前需要搖勻)。注意：zuì好每次少量加入，切莫一下倒入，否則蛋白質(zhì)容易變性?；旌线^程中，蛋白質(zhì)沉淀可能會使溶液呈牛奶狀，屬于正常現(xiàn)象。
6．將所需溶液A全部加入后，冰上放置60分鐘或過夜讓蛋白質(zhì)充分沉淀。
 注意：血紅蛋白、肌紅蛋白和清蛋白等在較高的溫度25℃比在0℃度時溶解度低，更容易鹽析，所以濃縮這些樣品時冰浴放置可以改為室溫放置。有的蛋白質(zhì)15-20分鐘就可以完全沉淀，有的則需要數(shù)小時。
7．將溶液輕移到旋蓋塑料離心管或離心瓶中，在平衡條件下15000×g 4℃離心15分鐘。
 注意：溶液比重很大，一定要重量上平衡而非體積平衡。
8．小心棄上清，得到蛋白質(zhì)沉淀。此沉淀可以在4℃放置數(shù)月。
9．將盡可能少的無菌水或其他緩沖液加入蛋白質(zhì)沉淀中使之溶解，所加體積一般是沉淀物體積的1-2倍。如果沉淀溶解后非常粘稠，可以適當補加無菌水使其變得不粘稠。此沉淀可以在4℃放置幾天。
10．如果溶液中有不溶物(主要是變性的蛋白質(zhì))，可以15000×g 4℃離心15分鐘，留上清。
11．上清液可以用于SDS-PAGE電泳檢測或UV法蛋白質(zhì)濃度測定。
12．如果后續(xù)純化方法是疏水層析或排阻層析，則不需要將溶液中殘留的鹽去掉，可以直接使用。如果后續(xù)純化是離子交換層析，則需要將溶液中殘留的鹽去掉，一般采用透析法，具體操作見附一。

附一：透析脫鹽
1．將蛋白溶液轉(zhuǎn)移到一端已經(jīng)封口的透析袋內(nèi)，預留一些液體膨脹的空間，然后將另一端封口。注意：用戶需要預處理透析袋，預處理的方法是將透析袋在含2%(W/V)碳酸氫鈉和1mM EDTA的溶液中煮沸10分鐘，用蒸餾水徹底清洗透析袋，然后放在1mM EDTA的溶液中煮沸10分鐘并浸沒在此溶液中冷卻，zuì后放4℃保存待用。取用時必須要戴手套。
2．將透析袋放置在裝有透析液的容器中，透析液的體積必須是蛋白質(zhì)溶液的20-100倍，溶液zuì好處于攪拌狀態(tài)。用戶可以用適合后續(xù)實驗的任何緩沖液作為透析液。每次透析3-4小時，共透析2-3次?？梢杂米詡涞妮潦显噭z測透析袋外面溶液是否還有殘留的銨離子來檢測透析是否完成。
3．將透析后的溶液全部轉(zhuǎn)移到離心管中，15000×g 4℃離心15分鐘，上清液即為濃縮后的蛋白溶液?？梢苑?80℃冰箱保存或立即用于后續(xù)的實驗。
4．如果需要快速測定蛋白質(zhì)的濃度，可取少許樣品作適當倍數(shù)稀釋后，用紫外分光光計測280nm和260nm的光吸收，再計算其濃度，計算公式為：蛋白濃度(mg/mL)＝(1.45×OD280-0.74×OD260)×樣品稀釋度。

附二：多克隆抗體的濃縮
1．將待處理的血清樣品在4℃或室溫20000×g離心30分鐘，收集上清。
2．取上清20mL與等體積的自備生理鹽水混合后，于攪拌下緩慢滴加40mL溶液A。
 注：加等量生理鹽水的目的是將蛋白質(zhì)含量降低到2.5-3.0%，否則其他蛋白質(zhì)會跟抗體一起共沉淀。
3．冰上放置30分鐘以上或過夜，使蛋白質(zhì)充分沉淀。
4．將溶液轉(zhuǎn)移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心10分鐘，棄上清。
5．用12mL自備生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀。
6．于攪拌下緩慢滴加8mL溶液A，冰上放置1小時使蛋白充分沉淀。
7．將溶液轉(zhuǎn)移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心10分鐘，棄上清。
8．用13.3mL 生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀。
9．于攪拌下緩慢滴加6.6mL溶液A，冰上放置1小時使蛋白充分沉淀。
10．將溶液輕移到旋蓋塑料離心管中，15000×g 4℃離心10分鐘，棄上清。
11．用少許生理鹽水溶解蛋白質(zhì)沉淀，并轉(zhuǎn)移到透析袋中。
12．用大于20-100倍體積的PBS 于4℃對蛋白質(zhì)溶液進行透析，更換透析液數(shù)次，然后讓蛋白質(zhì)溶液置-80℃保存或用其他方法進一步純化。

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