特別提示:包括EPI400化學感受態(tài)細胞在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產品名稱:EPI400化學感受態(tài)細胞
英文名稱:EPI400 Chemically Competent Cell
產品貨號:MQ0034
產品規(guī)格:10×100μl/50×100μl
EPI400來源于EC100菌株,將EC100核基因中控制質粒拷貝數(shù)的pcnB基因刪除后引入一個誘導啟動子驅動的pcnB基因,即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低質粒的拷貝數(shù),特別適合于各種不穩(wěn)定DNA或毒性基因的克隆,在加入誘導劑-CopyCutter Induction Solution后又可以提高質粒產量到正常狀態(tài)。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。lacZΔM15標記的存在使EPI400可用于藍白斑篩選,tonA賦予其抗噬菌體T1和T5的能力,rpsL賦予其鏈霉素抗性。EPI400感受態(tài)細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率可達5×107 cfu/μg DNA。
保存條件:-80℃
基因型:
F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697galU galK λ-rpsL(StrR)nupG trfA tonA pcnB4 dhf
操作說明:
1.EPI400感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蜻B接產物)并用手撥打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4.5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或1.LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。
注意事項:
1.感受態(tài)細胞zuì好在冰上融化。
2.混入質粒時應輕柔操作。
3.轉化高濃度的質??上鄳獪p少zuì終用于涂板的菌量。
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