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產(chǎn)品名稱:RNase A溶液(100mg/ml)
英文名稱:RNase A(100mg/ml)
產(chǎn)品貨號:WE0225
產(chǎn)品規(guī)格:1ml
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關(guān)注
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名稱:Tth DNA聚合酶
貨號:BTN90501
規(guī)格:250U
本酶來源于嗜熱菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二價陽離子存在的情況下,具有DNA多聚酶活性。它與Taq酶一樣被廣泛用于PCR反應(yīng),但耐熱性比Taq酶高,因此對高GC含量模板的PCR 也有較好的效果。本酶基本上沒有3′→5′外切酶活性及5′→3′外切酶活性,所以也可用于雙脫氧法測序。另外,本酶具有RTase活性,在Mn2+存在的情況下,RTase活性會得到強(qiáng)化。利用該特性,可以用來在同一管中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng),即一步法RT PCR。(但是,在Mn2+存在時,RT-PCR的準(zhǔn)確性不高)此外,本酶與Taq DNA多聚酶一樣,PCR產(chǎn)物可通過T載體進(jìn)行TA克隆。
產(chǎn)品特點:
1.RT-PCR反應(yīng)的特異性增加:在較高的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,增加了引物雜交和延伸的特異性。
2.二級結(jié)構(gòu)減少:在較高的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,減少了由于RNA二級結(jié)構(gòu)引起的問題。
產(chǎn)品組成:
成分
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規(guī)格
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Tth DNA聚合酶(5U/μL)
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50μl
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10×Tth Buffer
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1ml
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說明書
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1份
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儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
以λDNA為模板,以10×Tth Buffer(+MgCl2)作為緩沖液進(jìn)行體積為50μL的PCR擴(kuò)增反應(yīng)為例
1.按下列組份配制PCR反應(yīng)液。
成分
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終濃度
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用量
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Tth DNA聚合酶(5U/μL)
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1.25U
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0.25μl
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10×Tth Buffer(+MgCl2)
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1×
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5μl
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dNTP Mixture(各2.5mM)
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各0.2mM
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4μl
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模板DNA
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50pg~1μg
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詳見下表
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引物1(10μM)
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0.1~1μM
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zuì多到1μL
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引物2(10μM)
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0.1~1μM
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zuì多到1μL
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滅菌蒸餾水
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加到50μL
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推薦50μL PCR反應(yīng)體系中模板DNA推薦使用量:
哺乳動物基因組DNA
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0.5~1μg
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酵母基因組DNA
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5~500ng
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細(xì)菌基因組DNA
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0.5~50ng
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質(zhì)粒DNA
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5~500pg
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PCR回收片段
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1~100pg
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2.PCR反應(yīng)條件
以λDNA為模板,擴(kuò)增1kbp的DNA片段的PCR反應(yīng)條件如下:

注:PCR反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況,設(shè)定zuì佳的反應(yīng)條件(溫度、時間等)。
注意事項:
1.循環(huán)測序:該酶為耐熱性酶,可通過與PCR 同樣的溫度條件進(jìn)行測序反應(yīng)。由于其高溫穩(wěn)定性好,對于復(fù)雜結(jié)構(gòu)的模板效果較好。
2.引物:用于耐熱性酶測序的引物需比用于非耐酶測序的引物設(shè)定更長的時間。采用較短的引物時,可能會出現(xiàn)不能獲得條帶變淡的情況。
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