特別提示:包括kFluor488標(biāo)記抗小鼠免疫熒光染色試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:kFluor488標(biāo)記抗小鼠免疫熒光染色試劑盒
英文名稱:Immunol Fluorescence Staining Kit with kFluor488-Labeled Goat Anti-Mouse IgG
產(chǎn)品貨號(hào):KFS049
產(chǎn)品規(guī)格:300T
適用于細(xì)胞或組織切片的免疫熒光染色。在有適當(dāng)?shù)囊豢箼z測(cè)特定的目標(biāo)蛋白時(shí),就可以使用免疫熒光染色試劑盒檢測(cè)到紅色、綠色或藍(lán)色等熒光。含有kFluor488標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG(H+L)抗體,可以用于檢測(cè)兔來(lái)源的相應(yīng)一抗,觀察到的顏色為非常鮮艷的綠色。kFluor488(Ex/Em:495nm/519nm)是一種常用的非常明亮的綠色熒光探針。它比大部分常用的綠色熒光探針更加明亮,更加不容易淬滅,而且背景更低。kFluor488的熒光光譜與FITC和Cy2比較接近。
本試劑盒提供了含有熒光標(biāo)記抗體穩(wěn)定劑的免疫熒光染色二抗稀釋液,可以確保熒光標(biāo)記抗體稀釋后在4℃可以保存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月,并且在6個(gè)月內(nèi)至少可以重復(fù)使用10次。
本試劑盒含有抗熒光淬滅封片液,可以使熒光更加持久。
本試劑盒對(duì)于六孔板內(nèi)的細(xì)胞樣品或常規(guī)切片,至少可以檢測(cè)300個(gè)樣品。
注意事項(xiàng)
1. 需熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
2. 在使用抗熒光淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅,但仍宜盡量避光,特別是需要盡量縮短在熒光顯微鏡下的觀察時(shí)間。
3. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,染色后宜盡快進(jìn)行熒光顯微鏡下的觀察。如果不能及時(shí)觀察可以4℃避光保存,但存放時(shí)間通常不宜超過(guò)一周,隨著存放時(shí)間的延長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致觀察效果越來(lái)越差。免疫熒光染色效果的好壞和一抗的關(guān)系非常密切。建議選購(gòu)有較多文獻(xiàn)報(bào)道的并注明可以用于免疫熒光染色的一抗用于本實(shí)驗(yàn)。
4. 如果觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)熒光過(guò)弱,可以適當(dāng)提高一抗的濃度;如果熒光還是比較弱,可以適當(dāng)提高熒光標(biāo)記抗體的濃度。
5. 需自行配制用于免疫熒光染色的相關(guān)試劑,需自備蓋玻片和載玻片。
6. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
根據(jù)您的關(guān)注的
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名稱:動(dòng)物細(xì)胞裂解液B(變性)
貨號(hào):BTN80807B
規(guī)格:100mL
本產(chǎn)品含有多種細(xì)胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養(yǎng)細(xì)胞,使之釋放出細(xì)胞內(nèi)蛋白,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.快速裂解,多種裂解成分經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,能快速使細(xì)胞裂解。
2. 非變性(BTN80807A)產(chǎn)品能zuì大程度地保留蛋白天然結(jié)構(gòu)和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,還可以用于蛋白活性檢測(cè)(信號(hào)傳遞研究和酶動(dòng)力學(xué)檢測(cè))和Western Blot等各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3.變性(BTN80807B)裂解細(xì)胞的效率更高,主要用于對(duì)抗原空間構(gòu)型不敏感的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn),還可以用于Western Blotting。
4.適用于培養(yǎng)細(xì)胞(包括懸浮細(xì)胞)和新鮮組織。
儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸、4℃保存,有效期一年。
注意事項(xiàng):
1. 如果在本產(chǎn)品中額外再加入終濃度為1×的、新鮮配制的蛋白酶抑制劑復(fù)合物,可以更有效地抑制蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2. 如果用于信號(hào)傳遞研究,zuì好在本產(chǎn)品中加入終濃度為1×的、新鮮配制的磷酸酶抑制劑復(fù)合物。
3. 整個(gè)裂解步驟都要在冰浴或4℃操作。本產(chǎn)品和PBS 均需預(yù)先冷卻。
4. 本產(chǎn)品所含有較高濃度的去垢劑會(huì)對(duì)Bradford蛋白濃度測(cè)定有較大影響,因此只能使用BCA法測(cè)定蛋白濃度。
使用方法:
一:
處理貼壁的培養(yǎng)細(xì)胞
1. 去除貼壁細(xì)胞培養(yǎng)液,用冰浴預(yù)冷的PBS 洗兩遍,去盡殘留的PBS。
2. 將培養(yǎng)板放置在冰上待用。
3. 按每106個(gè)細(xì)胞加入0.1mL 本產(chǎn)品(或100mm 貼壁細(xì)胞加1mL 本產(chǎn)品)的比例向培養(yǎng)板中加入適量的本產(chǎn)品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白濃度約在5-10mg/mL 之間)。
注意:裂解效率跟細(xì)胞數(shù)量和本產(chǎn)品用量的比例密切相關(guān)。一般情況下6孔板的單孔(1~2×106細(xì)胞)需要0.1~0.2mL本產(chǎn)品;25 cm2培養(yǎng)瓶(3~6×106細(xì)胞)需要0.3~0.6mL;75 cm2培養(yǎng)瓶(1~2×107細(xì)胞)需要1~2mL。對(duì)于特別大或特別小的細(xì)胞,需要用戶摸索zuì佳用量。
4. 冰上放置10-30分鐘(zuì佳時(shí)間跟細(xì)胞系相關(guān)),其間偶爾輕輕搖晃或用槍頭輕輕吹打。
5. 將細(xì)胞培養(yǎng)板傾斜使上清液匯集在一端,并將其全部轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中。
6. 15000×g,4℃離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,放置在冰上待用或放-80℃長(zhǎng)期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鮮使用。
7. 用前zuì好先測(cè)定上清液的蛋白濃度,然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western或免疫沉淀操作。
二:
處理懸浮細(xì)胞
1. 400×g,4℃離心10分鐘收集懸浮細(xì)胞,棄上清。
2. 用等體積的預(yù)冷PBS 洗滌細(xì)胞沉淀兩遍,步驟同步。
3. 按每106個(gè)細(xì)胞加入0.1mL 本產(chǎn)品的比例加入本產(chǎn)品,充分懸浮細(xì)胞。
4. 冰上放置15分鐘裂解細(xì)胞,期間偶爾輕柔震蕩。
5. 15000×g,4℃離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中。為避免吸取到細(xì)胞沉淀,zuì好留20-40μL液體不取。
6. 將上清液放置在冰上待用或放-80℃長(zhǎng)期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鮮使用。
7. 使用前zuì好先測(cè)定上清液的蛋白濃度,然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western或免疫沉淀操作。
三:
處理組織塊
1. 稱量組織塊,用毛玻片或玻璃勻漿器研磨或勻漿,用5-10倍體積的、預(yù)冷的PBS洗兩次(包括沖洗器材)。
2. 將勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管中,1500g、4℃離心5分鐘后棄上清。
3. 按每50mg 組織加入0.2mL 本產(chǎn)品的比例加入預(yù)冷的本產(chǎn)品,吹打混勻,放置冰上。
4. 每隔5分鐘振蕩器輕柔振蕩一次,共4次。
5. 15000×g、4℃離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,放置在冰上待用或放-80℃長(zhǎng)期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鮮使用。
6. 使用前zuì好先測(cè)定上清液的蛋白濃度,然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western或免疫沉淀操作。

關(guān)注
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