禽流感病毒H5/H7/H9亞型熒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，我公司專注于病毒PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的禽流感病毒H5/H7/H9亞型熒質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。

特別提示：包括禽流感病毒H5/H7/H9亞型熒光RT-PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：禽流感病毒H5/H7/H9亞型熒光RT-PCR檢測試劑盒
英文名稱：H5/H7/H9 Subtypes of Avian Influenza Virus qRT-PCR Kit
產(chǎn)品貨號：BTN11-170601
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本產(chǎn)品是基于實(shí)時熒光RT-PCR法的禽流感H5、H7、H9亞型快速檢測試劑盒。禽流感（Avian Influenza, AI）是由正粘病毒科中禽流感病毒（Avian Influenza Virus, AIV）引起的一種禽類的疾病綜合征。AIV基因組由8個負(fù)鏈股RNA片段組成,其血清亞型眾多，抗原變異性強(qiáng)，宿主范圍廣泛。禽流感H5、H7、H9亞型的致病性強(qiáng)，危害大。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 靈敏度高，可以達(dá)到50拷貝/μL，遠(yuǎn)高于常規(guī)方法。
2. 可分別對禽流感病毒H5、H7和H9亞型進(jìn)行定量測定。
3. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。

產(chǎn)品組成：

組分	編號	規(guī)格(50T)
2×RT MasterMix	BTN170403	0.5mL
2×qPCR Mix	BTN90408	1.1mL×2
H5專一性引物對	yw13211322	100 μL
H5 陽性對照，XXX 10E9拷貝/μL	yw13231324	50 μL
H7專一性引物對	yw13251326	100 μL
H7陽性對照，XXX 10E9拷貝/μL	yw13271328	50 μL
H9專一性引物對	yw13291330	100 μL
H9陽性對照，XXX 10E9拷貝/μL	yw13311332	50 μL
超純水	BTN100935	1mL

保存條件：-20℃保存，有效期一年。

根據(jù)您的關(guān)注的禽流感病毒H5/H7/H9亞型熒光RT-PCR檢測試劑盒，禽流感病毒H5/H7/H9亞型熒光RT-PCR檢測試劑盒，BTN11-170601，百奧萊博，，，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：

貨號	名稱	規(guī)格
SYA141	腺病毒(ADV)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒	48次/盒
SYA153	高致病性禽流感H5N1病毒雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒	48次/盒
SYA161	流感病毒N1型單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒	48次/盒
SYA186	呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB分型雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒	48次/盒
SYA195	乙型流感病毒(IFVB-YA)分型單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒	48次/盒
SYA209	甲型肝炎(HAV)病毒單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒	48次/盒
SYA229	黃熱病毒單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒	48次/盒

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名稱：高致病性禽流感H5N1病毒雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號：SYA153
規(guī)格：48次/盒

名稱：流感病毒N1型單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號：SYA161
規(guī)格：48次/盒

名稱：人副流感病毒1型單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號：SYA174
規(guī)格：48次/盒

名稱：人副流感病毒2型單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號：SYA175
規(guī)格：48次/盒

名稱：人副流感病毒3型單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號：SYA176
規(guī)格：48次/盒

名稱：冠狀病毒(OC43)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號：SYA181
規(guī)格：48次/盒

名稱：人副流感病毒1型/3型雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號：SYA187
規(guī)格：48次/盒
一、簡介：
本試劑盒用一對人副流感病毒1 型特異性引物，一對人副流感病毒3 型特異性引物，分別結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法雙重?zé)晒釸T-PCR 技術(shù)對人副流感病毒1 型/3 型RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。本試劑盒中人副流感病毒1 型的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM，人副流感病毒3 型的探針報(bào)告基團(tuán)為VIC/HEX/JOE。

二、用途：
本試劑盒適用于各種咽拭子、鼻拭子樣品等臨床樣品中人副流感病毒1型/3型的特異性檢測。適用于人副流感病毒1型/3型感染的輔助診斷、監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
人副流感1型/3型反應(yīng)液(PIV1/PIV3-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感1型/3型陽性對照(PIV1/PIV3-PTC) 1管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-80℃，但不能超過6個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
6.1.1 血清：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入無菌的干燥玻璃管，室溫(22-25℃)放置30-60min，血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清，或直接使用水平離心機(jī)，3000rpm離心5min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.2 血漿：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，5-10min后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.3 拭子、分泌物等樣品：在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水，劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無RNA酶污染的離心管中，6000rpm離心20s，取上清備用。
6.1.4 病灶組織樣品：稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理鹽水研磨至無塊狀物，然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液于1.5mL滅菌離心管中。
6.2 RNA提取
可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取4μL 加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR 反應(yīng)液(PIV1/PIV3-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 12μL N×12μL
酶混合物 4μL N×4μL
總量 16μL N×16μL
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm 離心10s，向設(shè)定的N 個PCR 反應(yīng)管中分別加入16μL，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(PIV1/PIV3-PTC)4μL，10000rpm 瞬時離心10秒。
7.2 qRT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 50℃ for 30 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 5 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM和VIC(若儀器無VIC通道，可選擇HEX或JOE通道)。其中FAM基團(tuán)檢測PIV1，VIC/HEX/JOE基團(tuán)檢測PIV3。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX 參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均無擴(kuò)增。
(2) 陽性對照(PIV1/PIV3-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有擴(kuò)增。
以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效
8.3 結(jié)果判定
(1) FAM通道：Ct值≤35 PIV1核酸為陽性；Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明PIV1核酸陰性。Ct值在35-40個循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明PIV1核酸陽性；否則判為樣本陰性。
(2) VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 PIV3核酸為陽性；Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明PIV3核酸陰性。Ct值在35-40個循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明PIV3核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
(1) 初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA 酶。
(3) PCR 操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR 擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行，以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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