石蠟包埋組織miRNA提取試劑盒由專業(yè)試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要石蠟包埋組織miRNA提取試劑盒等RNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術服務，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關系，擁有較好的企業(yè)信譽和品牌形象。

特別提示：包括石蠟包埋組織miRNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：石蠟包埋組織miRNA提取試劑盒
英文名稱：miRNA Extraction Kit from FFPE
產(chǎn)品貨號：WH0127
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒提供獨特的裂解和孵育條件，可以逆轉(zhuǎn)福爾馬林對RNA造成的交聯(lián)。在二甲苯脫蠟后，利用特別研制的裂解緩沖液處理，可有效地將RNA從組織切片中釋放出來，并用DNase I消化，避免了基因組DNA污染。經(jīng)硅基質(zhì)膜純化后可獲得＞18nt的RNA，產(chǎn)物可直接用于RT-PCR、RTqPCR、生物芯片分析等下游實驗。

產(chǎn)品特點：
·針對性強：專為提取FFPE中的miRNA設計，試劑盒組分進行特別優(yōu)化；
·純度高：柱法純化，產(chǎn)物無gDNA和鹽離子污染；
·簡單快速：2h內(nèi)即可獲得高質(zhì)量的miRNA。

提取流程圖：


試劑盒組成：

組分	規(guī)格
裂解液RF	12ml
緩沖液RB	2×12ml
漂洗液RW	12ml
Proteinase K	500μl
RNase-Free ddH2O（瓶裝)	15 ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管)	50套
DNase I	1500U
緩沖液RDD	4 ml
RNase-Free ddH2O（管裝)	1 ml
RNase-Free離心管（1.5ml)	50個

儲存條件：15-25℃，DNase I，緩沖液RDD和RNase-Free ddH2O（管裝）置于2-8℃保存

注意事項：（請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。）
1．次使用前應在漂洗液RW中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標簽。
2．DNase I儲存液的配制
  將DNase I干粉（1500U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，輕柔混勻，分裝后-20℃貯存（可保存9個月）。
  注意：從-20℃融化后的DNase I儲存液保存于4℃（可保存6周），不要再次凍存。

起始材料：
1．標準的福爾馬林固定石蠟包埋程序也常常會造成核酸的片段化。為了盡量降低RNA片段化的可能性，應該按照以下操作步驟進行樣本處理：
  組織切除后應盡快浸入4%-10%的福爾馬林溶液中；
  固定時間zuì好為14-24 h（固定時間過長會導致RNA片段化更嚴重，不利于下游的試驗)；
  樣本包被之前必須徹底脫水。
2．應采用新鮮的FFPE組織切片，切片厚度不超過10μm，切片過厚可能會造成RNA得率低，每次制備采用的切片數(shù)應不超過8片，表面積應不超過250mm2。
3．如果沒有起始樣本的信息，建議初次制備采用的切片數(shù)應不超過2片，然后根據(jù)實驗結(jié)果，下次制備采用的切片數(shù)可以進行調(diào)整，但應不超過8片。

操作步驟：

1．將石蠟樣品切成5-10μm厚的片狀。
  注意;如果樣品表面暴露于空氣中,zuì初的2~3片棄掉不用。
2．迅速將2-8張切片置于1.5 ml RNase-free的離心管中，加入1 ml二甲苯，劇烈渦旋10sec。
3．室溫（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)離心2min。
4．用槍頭吸除上清，小心不要吸到沉淀。
5．加入1 ml無水乙醇于沉淀中，渦旋混勻。
6．室溫（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)離心2min。
7．用槍頭吸除上清，小心不要吸到沉淀（用一個新的槍頭小心吸出殘余的乙醇）。
8．打開管蓋，室溫（15-25℃)或37℃放置10 min直至殘余的乙醇揮發(fā)完全。
  注意：完全去除殘余的乙醇很重要，殘余的乙醇會對RNA產(chǎn)生影響。
9．加入150 μl裂解液RF以及10 μl Proteinase K于沉淀中，徹底渦旋混勻。
10．55℃孵育15 min之后80℃孵育15 min。
11．冰上放置3 min，12000rpm （~13400×g)離心15 min，轉(zhuǎn)移上清至新的2 ml RNaseFree離心管中。
12．加入16 μl的RDD buffer和10 μl的DNase I溶液，顛倒混勻。室溫放置15 min。簡短離心以收集管壁及管蓋上的液滴。
13．加入320 μl的緩沖液RB，渦旋混勻。
14．加入1120 μl的無水乙醇，渦旋混勻（可能會出現(xiàn)沉淀)。
15．轉(zhuǎn)移700 μl溶液和沉淀入吸附柱CR3中（吸附柱放在收集管中），12000rpm（~13400×g)離心1 min，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
16．重復步驟15，直到所有的溶液和沉淀完全通過吸附柱CR3，棄廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。
17．向吸附柱CR3中加入500μl漂洗液RW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），室溫靜置2min，12000rpm （~13400×g)離心30-60 sec，棄廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。
18．重復步驟17。
19．室溫（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)離心2min，倒掉廢液。將吸附柱CR3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：此步驟目的是將吸附柱CR3中殘余的漂洗液去除，漂洗液的殘留，可能會影響后續(xù)的RT等實驗。
20．將吸附柱CR3轉(zhuǎn)入一個新的RNase-Free離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室溫放置2min，12000rpm （~13400×g)離心2min。
  注意：洗脫緩沖液體積不應少于30 μl，體積過小影響回收效率。RNA溶液請于-70℃保存。

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貨號	名稱	規(guī)格
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