特別提示:包括超低分子量蛋白Marker III(3.4~100kd)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:超低分子量蛋白Marker III(3.4~100kd)
英文名稱:μltra Low Molecμlar Weight Protein Marker III
產(chǎn)品貨號(hào):RFT046
產(chǎn)品規(guī)格:10T(50μl)
本產(chǎn)品包含5種多肽和3種低分子量蛋白質(zhì)組成,分子量范圍為3.4kD-100kD??梢杂脕?lái)判斷 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。
使用說(shuō)明:
次收到該產(chǎn)品,室溫融化后,徹底混勻,離心快甩將溶液完全收集到管底,根據(jù)需要適量分裝成小管,-20℃貯存,每次取一小管使用;本產(chǎn)品為即用型,融化后既能使用,不能95℃加熱處理。
一. 制膠:
I 配制分離膠
1.按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA(19:1)、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。
2.加入10%APS和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的水層,使凝膠表面保持平整。
4.靜置30-60分鐘,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
表一 (一塊0.75mm mini膠用量)
|
分離膠
|
濃縮膠
|
|
18%T, 5%C /6.0ml
|
5%T, 3.3%C/2 ml
|
40% PAA(19:1)
|
2.7 ml
|
/
|
40% PAA (29:1)
|
/
|
0.25 ml
|
4×凝膠緩沖液
|
1.5 ml
|
0.5 ml
|
乙二醇(電泳級(jí))
|
1.8ml
|
/
|
ddH2O
|
/
|
1.25 ml
|
10%APS
|
50-65μl
|
20μl
|
TEMED
|
6μl
|
2μl
|
注:如非必須,不要使用1.0mm和1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75mm的凝膠,這樣會(huì)減少電泳后染色和脫色的時(shí)間。
II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。
1.按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA(29:1)和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。
2.加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
3.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。
4.靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合
二. 電泳:
1. 取一管分裝好的Marker樣品,徹底融化,不要加熱處理,充分混勻后備用。
2. 電泳前,將10×Tris-Tricine-SDS電泳緩沖液用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的內(nèi)外槽加入1×緩沖液,輕柔拔出梳子,將Marker或蛋白樣品(樣品已經(jīng)過(guò)2×Tricine上樣緩沖液處理)加入點(diǎn)樣孔,根據(jù)表二條件進(jìn)行電泳,至藍(lán)色指示前沿至分離膠3/4位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2-3個(gè)小時(shí)。
注:如果電泳時(shí)間過(guò)短,染色時(shí),指示前沿容易遮擋小于5kd的小肽。
表二 多肽電泳條件
恒電壓
|
150 V
|
起始電流
|
45-55 mA
|
結(jié)束電流
|
10-15 mA
|
電泳時(shí)間
|
2-3小時(shí)
|
三. 染色
根據(jù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行染色和觀察。
儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期12個(gè)月。
根據(jù)您的關(guān)注的
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名稱:膽酸鈉
貨號(hào):BTN131048
規(guī)格:5g
本產(chǎn)品用于制備脂質(zhì)體和分離脂質(zhì)。HPLC測(cè)定其純度>99%。低紫外吸收(1%溶液的A280<0.08)??梢灾厣潭ɑ亩嗾尘谺 親和柱。
儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。
名稱:細(xì)胞凍存液
貨號(hào):YT951
規(guī)格:50ml
本品是一種即用型的培養(yǎng)細(xì)胞低溫凍存液,適用于大部分的哺乳動(dòng)物細(xì)胞凍存。如果每管細(xì)胞使用1ml細(xì)胞凍存液,一個(gè)包裝的本產(chǎn)品可以用于約50管細(xì)胞的凍存。
本產(chǎn)品是即用型的無(wú)菌溶液,待凍存的細(xì)胞收集后,加入適量?jī)龃嬉夯靹蚣纯桑瑹o(wú)需自行配制任何溶液,使用非常便捷。
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃的液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性長(zhǎng)期保存起來(lái),在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。同時(shí)適度地凍存一定量的細(xì)胞,可以防止因細(xì)胞被污染或其它意外事件而使細(xì)胞無(wú)法繼續(xù)培養(yǎng),起到了細(xì)胞保種的作用。
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇一般采用“慢凍快融”的方法,該方法能較好地保證細(xì)胞存活率。
本細(xì)胞凍存液包含了細(xì)胞凍存所需的所有組分,主要成分是高糖DMEM、適量澳洲進(jìn)口優(yōu)質(zhì)胎牛血清及DMSO等,并在此基礎(chǔ)上優(yōu)化了相關(guān)組分,可大大提高復(fù)蘇時(shí)細(xì)胞的存活率。
注意事項(xiàng):
1. 使用前需確保細(xì)胞凍存液完全融化,并輕輕混勻。融化后的細(xì)胞凍存液置于4℃保存。
2. 請(qǐng)確保凍存前細(xì)胞生長(zhǎng)情況良好,例如處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,并且凍存時(shí)存活率大于90%。
3. 建議細(xì)胞凍存在液氮中,可以長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行保存。如果置于-80℃保存,保存時(shí)間大約為1年。
4. 請(qǐng)使用耐受有機(jī)溶劑的marker筆進(jìn)行標(biāo)記,以防做的標(biāo)記被酒精或異丙醇等有機(jī)溶劑擦掉,而不能辨識(shí)。
儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期12個(gè)月。
名稱:SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)
貨號(hào):WE0286
規(guī)格:200ml
本產(chǎn)品為配制SDS-PAGE濃縮膠緩沖液,可用于配制各種濃度的變性及非變性PAGE凝膠,方便、快捷。產(chǎn)品中已加入10%SDS,使用時(shí)不用另外加入。
操作步驟:
根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,zuì佳膠濃度請(qǐng)參考附表1。
I 灌制分離膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表2)
1、參照凝膠模具說(shuō)明書(shū),裝配好凝膠模具。
注:加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸,是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。
2、將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和純水在小燒杯或試管中混合。
3、加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。
4、在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對(duì)于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可), 然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1 cm的水層,使凝膠表面保持平整。
5、靜置30-60分鐘,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后,表面凝膠已聚合。
II 灌制濃縮膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表3)
1、去除覆蓋在分離膠上的水層。
2、將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)濃縮膠緩沖液和純水在一個(gè)小燒杯或試管中混合。
3、加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。
4、將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。
5、將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。
6、靜置10~20分鐘,等待濃縮膠聚合。
7、待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。
8、進(jìn)行常規(guī)電泳操作。
附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與zuì佳分離范圍
SDS-PAGE 分離膠濃度
|
zuì佳分離范圍
|
6%膠
|
50-150 kD
|
8%膠
|
30-90 kD
|
10%膠
|
20-80 kD
|
12%膠
|
12-60 kD
|
15%膠
|
10-40 kD
|
附表2. 配制SDS-PAGE分離膠
分離膠濃度
|
凝膠體積
|
所需各組分體積(單位:ml)
|
純水
|
30%Acr-Bis(29:1)
|
分離膠緩沖液(4×)
|
10%APS
|
TEMED
|
6%
|
5ml
|
2.75
|
1.0
|
1.25
|
0.05
|
0.004
|
10ml
|
5.5
|
2.0
|
2.5
|
0.1
|
0.008
|
15ml
|
8.25
|
3.0
|
3.75
|
0.15
|
0.012
|
20ml
|
11
|
4.0
|
5
|
0.2
|
0.016
|
8%
|
5ml
|
2.42
|
1.33
|
1.25
|
0.05
|
0.003
|
10ml
|
4.8
|
2.7
|
2.5
|
0.1
|
0.006
|
15ml
|
7.25
|
4.0
|
3.75
|
0.15
|
0.009
|
20ml
|
9.7
|
5.3
|
5
|
0.2
|
0.012
|
10%
|
5ml
|
2.08
|
1.67
|
1.25
|
0.05
|
0.002
|
10ml
|
4.17
|
3.33
|
2.5
|
0.1
|
0.004
|
15ml
|
6.25
|
5.0
|
3.75
|
0.15
|
0.006
|
20ml
|
8.3
|
6.7
|
5
|
0.2
|
0.008
|
12%
|
5ml
|
1.75
|
2.0
|
1.25
|
0.05
|
0.002
|
10ml
|
3.5
|
4.0
|
2.5
|
0.1
|
0.004
|
15ml
|
5.25
|
6.0
|
3.75
|
0.15
|
0.006
|
20ml
|
7.0
|
8.0
|
5
|
0.2
|
0.008
|
15%
|
5ml
|
1.25
|
2.5
|
1.25
|
0.05
|
0.002
|
10ml
|
2.5
|
5.0
|
2.5
|
0.1
|
0.004
|
15ml
|
3.75
|
7.5
|
3.75
|
0.15
|
0.006
|
20ml
|
5
|
10.0
|
5
|
0.2
|
0.008
|
附表3. 配制5%SDS-PAGE濃縮膠
凝膠體積
|
所需各組分體積(單位:ml)
|
純水
|
30%Acr-Bis(29:1)
|
濃縮膠緩沖液(4×)
|
10%APS
|
TEMED
|
2ml
|
1.14
|
0.34
|
0.5
|
0.02
|
0.002
|
4ml
|
2.28
|
0.68
|
1
|
0.04
|
0.004
|
6ml
|
3.42
|
1.02
|
1.5
|
0.06
|
0.006
|
8ml
|
4.56
|
1.36
|
2
|
0.08
|
0.008
|
儲(chǔ)存條件:2~8℃
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關(guān)注
超低分子量蛋白Marker III(3.4~100kd),3.4~100kd,超低分子量蛋白Marker III(3.4~100kd),超低分子量蛋白Marker III,RFT046,百奧萊博,,的同時(shí),為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品:
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