【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：小鼠孕酮（P）定量ELISA檢測試劑盒說明書

英文名稱：Mouse Progesterone （P）ELISA KIT

【包裝規(guī)格】

48 人份/盒，96 人份/盒

【預(yù)期用途】 僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中小鼠孕酮（P）的濃度。

【檢驗(yàn)原理】 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被抗小鼠孕酮（P）抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加入小鼠孕酮（P）校準(zhǔn)品和待測樣本，再加入另一株 HRP 標(biāo)記的 抗小鼠孕酮（P）抗體（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固 相表面形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀上測定吸光度（OD值），吸光度（OD 值）與待測樣品中小鼠孕酮（P）的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì) 算出樣本中小鼠孕酮（P）的濃度。

【主要成成分】 主要成分

校準(zhǔn)品濃度依次為：16、8、4、2、1、0.5 ng/mL。校準(zhǔn)品已經(jīng)通過測試，結(jié)果表明 HBs抗原陰性，HIV1、HIV2 和 HCV 抗體陰性，由于不存在一種試驗(yàn)方法能夠完全保證沒有這些物 質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進(jìn)行處理，處理過程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

1、能夠檢測 450 nm 吸光度的酶標(biāo)儀。

2、移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水或去離子水

4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、1L 量筒

7、無粉一次性乳膠手套

8、稀釋用聚丙烯試管

【儲(chǔ)存條件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期 6 個(gè)月。

2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回

2-8℃冰箱。

3、開封后，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品、包被微孔板和 HRP 標(biāo)記抗體，有效期為 28 天， 其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

半自動(dòng)的酶標(biāo)儀，如 Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。

【樣本要求】 樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm 條件下離心 20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。

2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm 條件 下離心 20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在 4000rpm 條件下，離心 20 分鐘取上 清，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在 2-8℃條件下，可以儲(chǔ)存 72h，或者在- 20℃儲(chǔ)存 6 個(gè)月。樣本收集后，不是一次 檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分 解凍。

【試劑準(zhǔn)備】

1、使用前，所有的組分都要至少復(fù)溫 30min，確保充分復(fù)溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱 使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按 1:20 稀釋，即 1 份的濃縮洗滌液，添加 19 份的 蒸餾水。

3、底物：底物液 A 和 B，在使用前，按 1:1 體積充分混合，混合后 15 分鐘內(nèi)使用。

操作程序

1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。

2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加待測 樣本 50μL，空白孔不加。

5、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體 100μL。

6、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

7、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水 紙上拍干。

8、如此重復(fù) 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加 浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。

9、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反 應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min

10、所有孔加入終止液 50μL，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD 值）。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

檢測完成后，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的吸光度（OD 值）作為橫坐標(biāo)，利用計(jì)算 機(jī)軟件，采用四參數(shù) Logistic 曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計(jì)算樣品的濃度值。如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的終濃度。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線zui高濃度，請用檢測緩沖液稀釋樣本，并重新檢測。如果細(xì)胞

培養(yǎng)上清樣本需要較大的稀釋倍數(shù)，請用細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行適度稀釋。

6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。

7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。

小鼠PIF elisa檢測試劑盒代測 

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。

2、劑量反應(yīng)曲線線性校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù) r 值，大于等于 0.9900。

3、度

批內(nèi)度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評估。 批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于 10%。

批間度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批 間變異系數(shù) CV%小于 15%。

4、靈敏度：zui低檢出劑量小于 0.1ng/mL。

5、回收率：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行五次回收率評估，回收率在 85%-115%之間。

6、特異性 本試劑盒識別天然和重組小鼠孕酮（P），與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。

穩(wěn)定性2℃-8℃保存，有效期 6 個(gè)月。

 小鼠PIF elisa檢測試劑盒代測

【注意事項(xiàng)】 生物安全

1、檢測必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢 棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有 proclin-300 防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙 霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成 后徹底洗手。

4、試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時(shí)，請佩戴防護(hù)服，及防護(hù)眼睛、手及面 部的設(shè)施。

5、本試劑盒用于科學(xué)研究，不能用于診斷治療。

6、請不要使用其他批號或其他來源的試劑替代本試劑盒中的試劑。

技術(shù)要點(diǎn)