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價格：電議
所在地：北京
型號：48T
更新時間：2017-10-10
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公司地址：北京市海淀區上地信息路12號中關村發展大廈
劉哲(先生)
豬繁殖與呼吸綜合征美洲通檢病毒檢測試劑盒說明書20151201版
（Taqman探針一步法實時熒光RT-PCR）
編號：KA002.01YB
規格：50頭份
介紹： 豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome ,PRRS）俗稱豬藍耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征引起的一種豬高度易感的傳染病。母豬以發情滯后，坐胎率低，懷孕后期流產、死胎和弱胎為特征；乳豬和斷乳仔豬以嚴重呼吸道疾病和高死亡為特征。美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒（NA-PRRSV）是我國的主要流行毒株。衛生組織（OIE）將其列為必須通報疾病。我國2008年修訂的《一、二、三類動物疫病病種明錄》將其列為二類動物疫病。
用途：該試劑盒用于對 NA-PRRSV進行檢測，有助于NA-PRRSV的實驗室診斷、監測和流行病調查。
原理：本試劑盒采用一步法實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反應(One-Step Real Time RT-PCR) ，結合Taqman技術，對特異核酸進行定性或定量檢測。
試劑盒的組成
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試劑名稱 |
數量 |
|
NA-PRRS反應液 |
550μL×1管 |
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NA-PRRS酶 |
40μL×1管 |
|
NA-PRRS引物探針 |
100μL×1管 |
|
無核酸水 |
1000μL×1管 |
|
NA-PRRS陰性對照 |
1000μL×1管 |
|
NA-PRRS陽性對照 |
150μL×1管 |
保存期及貯藏條件：本產品-20℃避光可保存12個月。
樣品收集，操作和儲存
1. 選擇發病早期，無菌采樣并立即送往實驗室進行病毒檢測。
2. 樣品短期可在4℃冷藏保存，較長時間保存應在-20℃或者-70℃，并且避免反復凍融。
檢測步驟
1.核酸提取
樣品進行適當處理后，可采用本公司的核酸提取試劑盒，該試劑盒可用于對樣本中病毒RNA的提取，請按照提取試劑盒說明書進行操作。也可選擇其他合適的商品化產品。
2.擴增試劑的準備
將樣品數+1份陰性對照+1份陽性對照設為N，計算試劑所需量，反應體系配制見下表
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試劑名稱 |
N份用量（20μL 體系） |
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NA-PRRS反應液 |
10μL×（N+1） |
|
NA-PRRS酶 |
0.5μL×（N+1） |
|
NA-PRRS引物探針 |
1.8μL×（N+1） |
|
無核酸水 |
5.7μL×（N+1） |
將各試劑按照表中用量加入無菌離心管中，充分混勻，短暫離心后在PCR反應管中分別加入18μL混合液。
3.加樣
將制備好的樣本，陰性對照，陽性對照各取2μL分別加入對應反應管中，加完后蓋緊PCR反應管蓋，置于PCR儀上。
4.熒光PCR擴增與信號收集
|
循環數 |
溫度（℃） |
時間 |
數據收集位點 |
|
1 |
45 |
15min |
- |
|
1 |
95 |
2min |
- |
|
40 |
95 |
15s |
- |
|
|
60 |
1min |
數據收集 |
注：報告基團選FAM,淬滅基團選NONE。
結果成立原則
陽性對照：CT值＜30并有明顯的擴增曲線。
陰性對照：無CT值或者CT值>37，線性為直線或者輕微斜線，無明顯擴增曲線。
以上要求需同時滿足，否則本次實驗無效，需要重新進行。
結果判定
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CT值 |
樣本檢測結果 |
|
<30并有明顯的擴增曲線 |
陽性，樣本中檢測出NA-PRRSV |
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30-37 |
可疑，需重復檢測。若第二次檢測CT值仍為30-37并有明顯擴增曲線則判定為陽性，否則為陰性。 |
|
>37并無擴增曲線 |
陰性，樣本中未檢測出NA-PRRSV |
注意事項
1.反應體系應在特定配液區或者超凈工作臺中配制，整個實驗過程嚴格控制污染。
2.PCR整個試驗分配液區、模板提取區、擴增區。流程順序為配液區→模板提取區→擴增區。嚴禁器材和試劑倒流。
3.使用不含熒光物質的一次性手套，一次性離心管。
4.反復凍融試劑將減低檢測靈敏度，本試劑盒應在5次內用完.
5．-20℃保存的各試劑管使用前應在室溫下完全融化，液體融化后需徹底混勻，2000 rpm離心15 s ，使用后立即放回-20 ℃。
6．在RNA提取過程中，避免RNA酶污染，盡量縮短操作時間。
7．注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過有效期限的試劑，試劑盒之間的成分不要混用。
8.PCR反應管避免氣泡存在，管蓋需蓋緊。
9.不同批次的試劑盒勿混用。
免責聲明：以上所展示的[48T 豬繁殖與呼吸綜合征美洲通檢病毒PCR檢測試劑盒]信息由會員[北京大有泰來生物技術有限公司]自行提供，內容的真實性、準確性和合法性由發布會員負責。
