近年來,轉(zhuǎn)基因食品產(chǎn)生的問題數(shù)不勝數(shù),給人們敲響了食品安全的警鐘。傳統(tǒng)的食品安全分析方法已經(jīng)不能滿足轉(zhuǎn)基因食品檢測的需要,迫切需要靈敏度更高、特異性更強(qiáng)、簡便快捷的食品安全檢測的技術(shù)和方法。因此,近幾年來各國的許多機(jī)構(gòu)和學(xué)者都致力于快速檢測方法和技術(shù)的研究,改進(jìn)和開發(fā)了一些快速的檢測技術(shù)和方法。
從福建檢驗檢疫局獲悉,該局研發(fā)“轉(zhuǎn)基因大豆2704-12(品系)的LAMP檢測引物及方法”獲發(fā)明授權(quán),這是福建檢驗檢疫局研發(fā)的轉(zhuǎn)基因檢測領(lǐng)域個。目前,這項技術(shù)已作為檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),在轉(zhuǎn)基因大豆檢測中進(jìn)行推廣應(yīng)用。
據(jù)福建檢驗檢疫局相關(guān)介紹,轉(zhuǎn)基因大豆2704-12品系是農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)允許進(jìn)口的,進(jìn)口時必須開展符合性驗證檢測的一種品系。外還未見轉(zhuǎn)基因大豆A2704-12品系LAMP檢測引物及方法的報道。此次福建檢驗檢疫局研發(fā)的轉(zhuǎn)基因大豆檢測方法,次設(shè)計、篩選到了轉(zhuǎn)基因大豆A2704-12品系的LAMP檢測引物,并建立普遍適用于基層實驗室的轉(zhuǎn)基因大豆A2704-12品系LAMP檢測方法。
檢測方法的
一、。LAMP方法只需要恒溫就能完成擴(kuò)增反應(yīng),沒有PCR反應(yīng)中那樣循環(huán)溫模板的變性、退火、復(fù)性過程,因此可將PCR法的2-3小時的擴(kuò)增時間縮短至約1小時,即能擴(kuò)增出109~1010倍靶序列拷貝,DNA產(chǎn)量高達(dá)500ug/mL,且能檢測到的拷貝數(shù)低至PCR檢測限的1/10。
二、簡便。因LAMP的恒溫擴(kuò)增和產(chǎn)物直觀檢測的特點使其只需要一個簡單的恒溫器,無需昂貴的檢測設(shè)備,有利于對現(xiàn)場檢測或基層實驗室推廣應(yīng)用。
三、高特異性。采用六個區(qū)段、六條引物對靶DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增,決定了LAMP法的特異性高于只用1對引物進(jìn)行擴(kuò)增的PCR法。
據(jù)悉,目前檢測轉(zhuǎn)基因特異品系的方法主要有普通PCR方法和實時熒光定量PCR方法。普通PCR方法耗時長,操作繁瑣,靈敏度不夠,容易產(chǎn)交叉污染,質(zhì)控復(fù)雜,假陽性、假陰性比例偏高。實時熒光定量PCR方法靈敏度高,但成本昂貴,技術(shù)要求高,且必須使用大型儀器設(shè)備。
此次福建運用LAMP這種新穎的恒溫核酸擴(kuò)增方法,在轉(zhuǎn)基因特異品系檢測領(lǐng)域有效建立了普遍適用于檢驗檢疫一線基層實驗室的快速、簡便、的轉(zhuǎn)基因品系檢測方法,檢測成本遠(yuǎn)低于熒光定量PCR。
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