產(chǎn)品名稱：人白介素1(IL-1)ELISA試劑盒
英文名稱：Human IL-1 ELISA KIT
使用目的：本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中的指標含量。
注：本試劑僅供科研，不得用于臨床！

實驗原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中指標水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，與HRP標記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算濃度。

簡介：
白介素1 (IL-1)是一種多肽，分子質(zhì)量為17 ku，有 IL-1a 及 IL-1β 兩種亞型。IL-1a 由159個氨基酸組成；IL-1β 含153個氨基酸；兩者由不同的基因分別編碼。雖其氨基酸順序僅有26％的同源性，然而IL-1a 和IL-1β 以同樣的親和力結(jié)合于相同的細胞表面受體，發(fā)揮相同的生物學(xué)作用。IL-1受體（IL-1r）IL-1r幾乎存在于所有有核細胞表面，每個細胞的IL-1r數(shù)目不等，少則幾十個（如t細胞），多則數(shù)千個（如成纖維細胞）。IL-1r主要有兩種類型：一種為IL-1r1，其分子伸入胞漿內(nèi)的肽鏈部分較長，起著傳遞活化信號的作用；另一種為IL-1r2，胞內(nèi)部分的肽段較短，不能有效地傳遞信號，而是將胞外部分的肽鏈釋放到細胞外液中，以游離形式與IL-1結(jié)合，發(fā)揮反饋抑制作用。gm-csf、g-csf及IL-1自身均可提高細胞IL-1r的表達水平，而tgf及皮質(zhì)類固醇能降低IL-1r的表達。

人白介素1(IL-1)ELISA試劑盒包括：
（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；
（2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）；
（3）酶的底物；
（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；
（5）結(jié)合物及標本的稀釋液；
（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；
（7）酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可在小試管中進行稀釋。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

結(jié)果判定方法
1)目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。